микробиологические испытания при контроле качества лекарственных средств

К данной rаботе есть prезентация, смотреть в моих работах с таким же названием. ...

Оглавление.
Введение……………………………………………………….. 3.
1.Лекарственные средства……………………………………..4-6
2.Кульутра микроорганизмов………………………………...7-11
3.Методы микробиологического контроля………………….12-29
3.1Испытания на стерильность……………………………….12-18
3.2.Испытания на микробиологическую чистоту…………...19-25
3.3.Количесвенное определение микроорганизмов…………26
3.4.Выявление и идентификация семейств бактерий…………27-29
Заключение………………………………………………………30
Список литературы……………………………………………..

В современном мире фармацевтика занимает ведущие место в промышлености. Без лекарственных средств человечество не сможет долго существовать. Этому свидетельствуют исторические факты. Различные вспышки заболеваний, с которыми трудно было бороться, а с некоторыми из них и вообще невозможно было справиться без лекарственных средств. На протяжение многих тысячелетий человек создавал различные снадобья, сыворотки, порошки против различных недугов. В последствие, с развитием технологий, и с увеличением знаний в области фармакологии появились понятия лекарственные средства, включающие в себя вещества различного действия и агрегатного состояния . Но не все созданные лекарственные средства стерильны, и чтобы .....................................................

Смешанные культуры могут быть приготовлены путем объединения чистых культур. Исследования, проводимые на смешанных культурах заданного состава, дают возможность понять, какими могут быть сложные формы взаимодействия микроорганизмов в местах их естественного обитания.3.Методы микробиологического контроля лекарственных средств. 3.1.Испытания на стерильность. Лекарственные средства для инъекций, глазные капли, мази, пленки, другие лекарственные средства, в отношении которых имеются соответствующие указания в нормативно - технической документации (НТД), должны быть стерильными. Стерильность лекарственных средств достигается соблюдением необходимых санитарно - гигиенических условий их изготовления и режима стерилизации. Отбор образцов для анализа. Образцы готовых лекарственных средств отбираютдля контроля от каждой серии в количествах, зависящих от вида стерилизации и числа единиц (ампул, флаконов и т.д.) в серии. В случае, если лекарственное средство стерилизуют насыщенным паром при избыточном давлении 0,11 +/- 0,02 МПа (1,1 +/- 0,2 кгс/кв. см) и температуре (121 +/- 1) град. С, образец состоит из 10 единиц. При других видах стерилизации минимальное количество образцов для анализа рассчитывают по формуле n = 0,4N n- число единиц в образце, а N - число единиц в исследуемой серии препарата, при этом n должно быть не менее 3 и не более 40. Определение антимикробного действия лекарственного средства. Во избежание неправильной оценки результатов анализа необходимо определить однократно для каждого наименования лекарственного средства, обладает ли оно антимикробным действием. Для этого в две пробирки с 10 мл тиогликолевой среды и в две - с 10 мл среды Сабуро добавляют соответствующее количество исследуемого лекарственного средства и вносят в каждую пробирку по 0,1 мл микробной взвеси соответствующего тест - штамма, содержащей 1000 клеток в 1 мл. Посевы в тиогликолевой среде инкубируют при температуре от 30 до 35 град. С в течение 48 ч, а на среде Сабуро - при температуре от 20 до 25 град. С в течение 72 ч. Контролем служат пробирки с питательными средами, в которые вместо данного лекарственного средства вносят аналогичное количество дистиллированной воды или соответствующего растворителя. Для проверки антибактериального действия лекарственных средств используют тест - микроорганизмы: Staphylococcus aureus АТСС 6538 Р, Bacillus subtilis ATCC 6633, Escherichia coli ATCC 25922, а противогрибкового действия - Candida albicans ATCC 885-653.При отсутствии антимикробного действия лекарственного средства в контрольных и опытных пробирках (колбах) должен наблюдаться рост перечисленных тест - микроорганизмов.При наличии антимикробного действия лекарственных средств используют соответствующие инактиваторы, указанные в частных фармакопейных статьях: (напр.: пара - аминобензойная кислота для сульфаниламидов, пенициллиназа - для пенициллинов и цефалоспоринов и т.д.). При отсутствии инактиватора препарат разводят, изменяя соотношение объемов посевного материала и питательной среды. Первоначально, не изменяя количества посевного материала, увеличивают объем питательной среды до 250 мл. Если при этом сохраняется антимикробное действие лекарственного средства, уменьшают объем посевного материала до 1 мл.В случае неэффективности разведения лекарственного средства используют метод мембранной фильтрации. Метод прямого посева. Испытуемый препарат, если необходимо, растворяют в соответствующем растворителе и высевают в определенных количествах. При испытании лекарственных средств посевы в тиогликолевой среде инкубируют при температуре от 30 до 35 град. С, а в среде Сабуро - от 20 до 25 град. С. Продолжительность инкубации посевов в обеих питательных средах составляет 14 сут. В случае помутнения питательной среды после внесения в нее испытуемого препарата следует в интервале от 3 до 7 сут. после посева сделать пересев на свежие аналогичные среды и инкубировать их при соответствующей температуре 14 сут от начала испытания.При испытании мазей и растворов лекарственных средств в маслах отбирают асептически по 0,1 г (мл) от каждой единицы и вносят в стерильную колбу вместимостью 250 мл, содержащую стеклянные бусы, 100 мл 1/15 мол фосфатного буферного раствора (рН 6,8-7,0) и эмульгатор. Перед проведением испытания содержимое колбы подогревают до температуры (41 +/-1) град. С. Колбу с испытуемым образцом встряхивают не более 30 мин до получения однородной эмульсии. Полученную эмульсию в количестве 5 мл переносят в колбу с 40 мл тиогликолевой среды и 5 мл - в колбу с 40 мл среды Сабуро. Посевы инкубируют 14 сут при соответствующей температуре для каждой питательной среды.Примечания. 1. Выбор эмульгатора и его количество зависят от природы мази и растворов лекарственных средств в маслах. Наиболее часто применяют твин-80 в концентрации до 2,5%, не оказывающей антимикробного действия.2. При испытании мазей, легко эмульгируемых в воде, эмульгатор не вносят в буферный раствор.3. При испытании мазей и растворов в маслах предпочтительнее использовать метод мембранной фильтрации.Метод мембранной фильтрации. При определении стерильности лекарственных средств, обладающих выраженным антимикробным действием, и лекарственных средств, разлитых в емкости более 100 мл, используют метод мембранной фильтрации.При испытании лекарственных средств с антимикробным действием от каждой серии независимо от ее объема отбирают 30 емкостей (ампул, флаконов и др.), которые делят на 3 группы по 10 емкостей. Емкости двух групп (20 штук) используют для испытания на стерильность, третьей группы (10 штук) - для контроля полноты отмывания мембраны от лекарственного средства. Испытание лекарственного средства на стерильность проводят с использованием фильтрационной установки, включающей фильтродержатель, соединенный с колбой - приемником. Фильтродержатель состоит из воронки с крышкой и основания из пористой пластины, на которую помещают мембрану. Используют мембраны с размером пор 0,45 +/-0,02 мкм, диаметром около 47 мм. Испытания проводят под вакуумом 93,3 кПа (70 см рт. ст.) при скорости вытекания воды 55-75 мл в 1 мин. Допускается использование аппарата, представляющего собой стерильную замкнутую систему и работающего также по принципу фильтрации растворов. Для фильтрации водных, масляных и спиртовых растворов рекомендуют использовать фильтры из эфиров целлюлозы или смесей эфиров целлюлозы. Фильтровальную установку в собранном виде стерилизуют насыщенным паром при избыточном давлении 0,11 +/- 0,02 МПа [(1,1 +/- 0,2) кгс/кв. см] и температуре (121 +/-1) град. С в течение 20 мин (температура и время критические). Стерилизацию можно осуществлять любым другим способом, обеспечивающим сохранность рабочих характеристик мембраны, а также стерильность мембраны и всей установки (ионизирующее излучение, окись этилена и т.п.).Испытуемое лекарственное средство растворяют или суспендируют (если в этом есть необходимость) в соответствующей стерильной жидкости и полученный раствор или суспензию пропускают через стерильную мембрану. Для растворения лекарственных средств с антимикробным действием и отмывания мембраны от них можно использовать любой растворитель, не подавляющий роста микроорганизмов, например, раствор натрия хлорида изотонического 0,9% для инъекций. Используемый растворитель перед стерилизацией необходимо профильтровать через мембраны с порами размером 0,45 +/-0,02 мкм для освобождения от механических примесей.Фильтрование отобранных образцов проводят в асептических условиях. Испытуемый раствор пропускают с помощью вакуума через одну или несколько мембран. При испытании лекарственных средств с антимикробным действием или содержащих консервант после окончания фильтрации мембрану необходимо промыть 3-5 порциями по 100 мл соответствующего растворителя, например растворам натрия хлорида изотонического 0,9% для инъекций или жидкости N 1 (см. с. 193), при испытании мазей - жидкости N 2 (см. с. 193). После отмывания мембраны ее извлекают, разрезают стерильными ножницами пополам и одну половину помещают в колбу со 100 мл тиогликолевой среды, вторую - в колбу со 100 мл среды Сабуро. Питательные среды с помещенными в них фильтрами выдерживают при температуре от 30 до 35 град. С (тиогликолевая среда) и от 20 до 25 град. С (среда Сабуро) в течение 7 суток при ежедневном просмотре.Для контроля стерильности растворов лекарственных средств, выпускаемых в виде порошков, лиофилизированных препаратов и пр., содержимое каждой емкости предварительно растворяют в стерильном растворителе. Затем из каждых 10 емкостей одной группы отбирают полученный раствор в количестве, соответствующем 200 мг лекарственного средства, и переносят в колбу, содержащую 100 мл аналогичного растворителя. Приготовленный раствор немедленно фильтруют. После отмывания фильтра, как указано выше, одну половину его помещают в колбу с тиогликолевой средой, вторую - в колбу со средой Сабуро.При испытании мазей и растворов лекарственных средств в маслах от каждой из 10 емкостей отбирают по 100 мг препарата в колбу со 100 мл растворителя (изопропилмиристат и др.), который предварительно подогревают до температуры не выше 45 град. С и стерилизуют фильтрованием через мембраны с размером пор (0,22 +/- 0,02) мкм. После фильтрации образца мембрану промывают двумя - тремя порциями по 200 мл жидкости N 2 и затем одной - двумя порциями жидкости N 1. Половину мембраны помещают в тиогликолевую среду, другую - в среду Сабуро, в которые предварительно вносят стерильный твин-80 из расчета 1 г на 1000 мл среды.При испытании лекарственных средств, разлитых в емкости большого объема, через фильтры пропускают содержимое 5-10 емкостей, если объем каждой емкости составляет от 100 до 500 мл. При наличии в емкости более 500 мл раствора на стерильность испытывают по 500 мл содержимого каждой из 5- 10 емкостей на 2-3 мембранах.При испытании лекарственных средств, представляющих собой вязкую жидкость или медленно фильтрующиеся суспензии, необходимо предварительно добавить растворитель, указанный в частной статье, для увеличения скорости фильтрации.Контроль полноты отмывания фильтра (третья группа емкостей) проводят следующим образом: при испытании антибактериального лекарственного средства в колбу с тиогликолевой средой и погруженной в нее половиной фильтра вносят суточную культуру Staphylococcus aureus ATCC 6538 Р, при испытании противогрибкового лекарственного средства - в колбу со средой Сабуро и фильтром вносят 48-часовую культуру Candida albicans ATCC 885-653 из расчета 100 микробных клеток на весь объем среды. Инкубацию проводят при соответствующих температурах. Наличие роста тест - микроорганизмов в контрольных колбах через 48-72 ч свидетельствует о достаточной полноте отмывания мембран от антимикробного лекарственного средства. Для контроля стерильности условий, в которых проводят испытания, необходимо фильтровать растворитель без испытуемого лекарственного средства с последующим воспроизведением всех вышеописанных операций.Учет и интерпретация результатов испытания на стерильность. Посевы просматривают в рассеянном свете ежедневно и по окончании периода инкубации. Наличие роста микроорганизмов в питательных средах оценивают визуально по появлению мутности, пленки, осадка и других макроскопических изменений. Выявленный рост микроорганизмов необходимо подтвердить микроскопированием мазков, окрашенных по Граму. Испытуемый препарат считают удовлетворяющим требованиям испытания на стерильность при отсутствии роста микроорганизмов. При обнаружении роста хотя бы в одной пробирке (колбе, флаконе) его подтверждают микроскопированием и повторяют испытание на таком же количестве образцов, как и в первый раз. При отсутствии роста микроорганизмов при повторном посеве испытуемый препарат считают удовлетворяющим требованию испытания на стерильность. В случае роста микроорганизмов при повторном посеве, морфологически сходных с микроорганизмами, выявленными в первичном посеве, испытуемый препарат считают нестерильным. Если при повторном посеве наблюдается рост микроорганизмов, отличающихся по морфологии от первоначально выделенных, испытание повторяют в третий раз на удвоенном количестве образцов. При отсутствии роста микроорганизмов после инкубации посевов в третьем испытании испытуемый препарат считают удовлетворяющим требованиям на стерильность. При наличии роста хотя бы в одной пробирке испытуемый препарат считают нестерильным.Питательные среды Для контроля стерильности применяют "Сухую питательную среду для контроля стерильности" (тиогликолевую) отечественного производства (ТУ 42.14 N 161-79) и среду Сабуро (жидкую). Вместо коммерческой тиогликолевой среды может быть использована тиогликолевая среда индивидуального приготовления.Состав и приготовление питательных сред. Тиогликолевая среда индивидуального приготовления: панкреатического гидролизата казеина 15,0 г дрожжевого экстракта (10%) 5,0 >> натрия хлорида 2,5 >> глюкозы 5,0 >> цистина (цистеина) 0,75 >> тиогликолевой кислоты или 0,3 мл тиогликолята натрия 0,5 г раствора резазурина натрия 1:1000 (свежеприготовленного) 1,0 мл агара 0,75 г воды дистиллированной до 1000 мл рН после стерилизации 7,0 +/- 0,2Тиогликолевую среду можно хранить в течение 14 сут со дня приготовления при температуре от 10 до 25 град. С в защищенном от света месте.В случае, если при хранении среды, содержащей резазурин, верхний слой среды (более 1/3 объема) окрасится в розовый цвет, среду можно регенерировать нагреванием на кипящей водяной бане в течение 10-15 мин до исчезновения розовой окраски с последующим быстрым охлаждением. В случае, если окраска не исчезает после нагревания, среду считают непригодной к употреблению. Регенерацию среды можно проводить только один раз.Среда Сабуро: пептона ферментативного 10 гглюкозы 40 >> воды дистиллированной до 1000 млрН после стерилизации 5,6 +/- 0,2Обе среды стерилизуют насыщенным паром при избыточном давлении 0,11 +/-0,02 МПа (1,1 +/-0,2 кгс/кв. см) и при температуре (121 +/-1) град. С в течение 15 мин. Жидкость N 1: пептона ферментативного 1 г воды дистиллированной до 1000 мл рН после стерилизации 7,1 +/-0,2Жидкость N 2:пептона ферментативного 5 г твина-80 10 гводы дистиллированной до 1000 млрН после стерилизации 7,1 +/-0,2Жидкости разливают в колбы по 100 мл и стерилизуют так же, как и питательные среды.Требования к ростовым свойствам питательных сред. Тиогликолевая среда и среда Сабуро должны обеспечивать визуально обнаруживаемый рост соответствующих тест - штаммов аэробных и анаэробных бактерий и грибов (предусмотренных НТД).Используемые питательные среды должны обеспечивать рост микроорганизмов при посеве их в количестве менее 100 жизнеспособных клеток: для тиогликолевой среды - не позднее 48 ч инкубации при температуре от 30 до 35 град. С и для среды Сабуро - не позднее 72 ч инкубации при температуре от 20 до 25 град. С.3.2. Испытания на микробиологическую чистоту. Необходимость проведения этого испытания вызвана тем, что лекарственные средства, в том числе выпускаемые в виде таких лекарственных форм, как таблетки, капсулы, гранулы, растворы, сиропы, мази, не стерилизуются в процессе производства. Поэтому они могут быть загрязнены микроорганизмами. Испытание включает количественное определение жизнеспособных бактерий и грибов и выявление некоторых видов микроорганизмов, представителей кишечной флоры и стафилококка, содержание которых недопустимо в нестерильных лекарственных средствах.Ниже представлена таблицы по нормам. Таблица 1. Микробиологическая чистота лекарственных средств.КатегорияПрименениеРекомендуемые нормы для Госфармакопеи XII издания1-Для парентерального введения-Глазные лекарственные средства-Для нанесения на открытые раны и ожоги-Другие лекарственные средства, к которым предъявляется требование "стерильность"Стерильность2-Для применения местно, трансдермально-Для применения (суммарно) - не более 102 интравагинально-Для введения в полости - Отсутствие бактерий уха, носа-Для введения в дыхательные пути (за исключением тех лекарственных средств, которые должны быть стерильными)-Общее число аэробных бактерий и грибов (суммарно) - не более 102 в 1 г или в 1 мл-Отсутствие бактерий семейства Enterobacteriace в 1 г или в 1 мл-Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1 г или в 1 мл-Отсутствие Staphylococcus aureus в 1 г или в 1 мл3А. Лекарственные средства из субстанций синтетического происхождении.Б. Лекарственные средства из субстанций природного происхождения (растительного, животного или минерального), за исключением лекарственных средств, включенных в Категорию В. Детские лекарственные средства-Общее число аэробных бактерий не более 103 в 1 г или в 1 мл-Общее число грибов - не более 102 в 1 г или 1 мл-Отсутствие Escherichia coli в 1 г или 1 мл-Общее число аэробных бактерий не более 104 в 1 г или в 1 мл-Общее число грибов - не более 102 в 1 г или в 1 мл-Отсутствие Escherichia coli в 1 г или в 1 мл -Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл-Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1г или в 1 мл-Отсутствие Staphylococcus aureus в 1г или в 1 мл-Энтеробактерий - не более 102 в 1 г или в 1мл-Общее число аэробных бактерий не более 500 в 1г или в 1мл-Общее число грибов - не более 50 в 1г или в 1мл-Отсутствие бактерий семейства Enterobacteriaceae в 1г или в 1мл-Отсутствие Pseudomonas aeruginosa в 1г или в 1мл-Отсутствие Staphylococcus aureus в 1г или в 1мл4Лекарственные средства, состоящие из одного вида сырья (фасованная продукция) или нескольких (сборы), а также растительное сырье "ангро"А. Лекарственные растительные средства или лекарственное сырье "ангро", применяемые в виде настоев и отваров, приготовленные с использованием термической обработкиБ. Лекарственные растительные средства или растительное сырье "ангро", применяемые без термической обработки-Общее число аэробных бактерий не более 107 в 1г или в 1мл-Общее число грибов - не более 105 в 1г или в 1мл-Escherichia coli - не более 102 в 1г или в 1мл-Общее число аэробных бактерий не более 105 в 1г или в 1мл-Общее число грибов - не более 104 в 1г или в 1мл-Отсутствие Escherichia coli - в 1г или в 1мл-Отсутствие Salmonella в 10 г или в 10 мл-Энтеробактерий - не более 103 в 1г или в 1млТаблица 2. Микробиологическая чистота субстанций и вспомогательных материалов для производства лекарственных средств.КатегорияПрименениеРекомендуемые нормы для Госфармакопеи XII издания1.2 2.2 3.2 4.2Субстанции для производства:Стерильных лекарственных средствНестерильных лекарственных средств, относящихся к Категории 2 Нестерилъных лекарственных средств, относящихся к Категории 3В Субстанции синтетического происхождения для производства нестерильных лекарственных средств Субстанции природного происхождения (растительного, животного или минерального) Вспомогательные материалы (мука пшеничная, крахмал, тальк и т.д.