Влияние продуктов пчеловодства на белковый обмен

1. Введение физиологического раствора вызывает изменение биохимических показателей белкового обмена крови. Выявлено статистически значимое (p 0,05) снижение мочевины и повышение фибриногена.
2. Введение адреналина вызывает угнетение белкового обмена крови, что выражается в снижении его показателей. Так, установлено достоверное (p 0,05) снижение концентрации мочевины в крови крыс. Однако, концентрация альбумина не изменяется.
3. Проведение ингаляций Апингалина на фоне введения адреналина приводит к снижению показателя общего белка в 1,2 раза (p 0,05) по сравнению с интактным уровнем, хотя тенденция к такому снижению отмечена и после введения адреналина (p 0,05), и после инъекции физиологического раствора (p 0,05). Концентрация альбумина не изменялась. Увеличивалось содержание фибрино ...

Введение 3
Обзор литературы 4
1. Апитерапия как перспективное направление 4
современной медицины. Апингалин и его лечебные свойства 4
1.1. Характеристика апингалина 7
1.2. Применение маточного молочка в лечебных целях 8
1.3. Применение прополиса в лечебных целях 11
2. Влияние адреналина на белковый обмен. Адреналиновый отек легких 15
3. Материалы и методы 20
4. Результаты и обсуждения 22
Выводы 27
Список литературы 28
Приложение 31

Апингалин – продукт пчеловодства, состоящий из маточного молочка и прополиса. В настоящее время появилось большое количество работ о положительном влиянии Апингалина на различные лабораторные показатели при патологиях, в том числе и при адреналовом моделированном отёке легких у крыс (Копылова, 2010; Анашкина и др., 2011; Крылов и др., 2015).
В диагностике патологических состояний одно из главных мест занимает исследования обмена белков, активности ферментов крови и других биологических жидкостей. Биохимические показатели отличаются высокой специфичностью, информативностью и диагностической ценностью. Белок, а точнее его концентрация, определяет коллоидно-осмотическое давление. Питание и функциональное состояние печени и почек, ряд заболеваний и метаболических нарушений выливаются в измен ение содержания белка крови или мочи. Определенные заболевания связаны с качественным или количественным изменением того или иного белка, благодаря чему возможно по его содержанию определить функциональное состояние органов и систем.
Целью работы явилось изучение влияния продуктов пчеловодства (на примере препарата «Апингалин») на белковый обмен. Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:
1. Изучить с помощью биохимических методов изменение показателей белкового обмена крови у крыс.
2. Определить, как изменяются показатели белкового обмена крови под действием адреналина при моделировании отека легких.
3. Проследить динамику показателя общего белка, концентрации альбумина, фибриногена, креатинина и мочевины на фоне ингаляций Апингалина при моделировании отека легких.

А. Сравнительная биохимическая оценка выраженности антиоксидантного действия биологически активных продуктов пчеловодства при экспериментальной свободно-радикальной патологии / В.А.Киселева, М.А.Киселев, М.А.Непеин // Окислительный стресс и свободно-радикальные патологии: Тез. докл. Х юбилейной Международной конференции. – Пицунда, 2014. – С. 26.62. Киселева В.А., Киселев М.А. Перспективы применения некоторых биологически активных продуктов пчеловодства в медицинской практике с учетом их антигипоксического антиоксидантного действия // Вестник Московского государственного областного гуманитарного института. Серия: медико-биологические науки. – 2014. № 2. С. 29 – 36.63.Копылова С.В. Влияние препарата «Апингалин» на некоторые показатели эндогенной интоксикации крови крыс при отеке легких /С.В. Копылова, А.А. Пашкина, Ю.А. Старателева // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. – 2010. – № 2 (2). – С. 532 – 535.64.Копылова С.В. Исследование показателей системы гемостаза крови крыс при ингаляционном введении препарата «Апингалин» в условиях моделирования отека легких / С.В. Копылова, Ю.А. Старателева // Международный научно-исследовательский журнал. – 2013. – №. 1-1 (8). – С. 78 – 80.65. Старателева Ю.А. Исследование системы крови крыс при ингаляционном введении препарата пчелиного маточного молочка и прополиса в условиях моделирования отека легких: Диссертация на соискание ученой степени канд. биол. наук/ Ю.А. Старателева. – Н.Новгород, 2010. – 109 с.66. Торкунов П.А. Токсический отек легких: патогенез, моделирование, методология изучения: Обзор / П.А. Торкунов, П.Д. Шабанов // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии: Рецензируемый научно-практический журнал. 2008. Т. 6, № 2. С. 3 54.67. Торкунов П.А. и др. Оценка участия протеаз нейтрофилов в развитии токсического отека легких / П.А. Торкунов, В.В. Марышева, М.Б. Варлашова и др. // Актуальные вопросы военно-полевой терапии. Терапевтическая помощь в экстремальных ситуациях. – СПб, 2003. – Вып. 4. – С. 215 – 217.68. Торкунов П.А., Шабанов П.Д. Патофизиология токсического отека легких. – СПб: Элби-СПб, 2007. – 176 с.69. Чучалин А.Г. Отек легких: физиология легочного кровообращения и патофизиология отека легких / А.Г. Чучалин // Пульмонология : Научно-практический журнал. 2005. № 4. С. 9 18.д) постановка эксперимента и статистическая обработка результатов70.Артишевский A.A. Гистология с техникой гистологических исследований: Учеб.пособие / A.A. Артишевский, A.C. Лентюк, Б.А. Слука. Мн.: Высш. шк., – 1999. – 236 с. 71. Атраментова Л.А. Статистические методы в биологии / Л.А. Атраментова, О.М. Утевская. – Горловка, 2008. – 248 c.72. Берковский А.Л. Пособие по изучению адгезивно-агрегационной активности тромбоцитов / А.Л. Берковский, С.А. Васильев, Л.В. Жердева. М.: Медицина, 2002. – 62 с.73. Блохин А.В. Теория эксперимента [Электронный ресур]: Курс лекций в двух частях: Часть 1. – Электрон. текст. дан. (1,1 Мб). – Мн.: Научно-методический центр “Электронная книга БГУ”, 2003. – Режим доступа: http://anubis.bsu.by/publications/elresources/Chemistry/blohin1.pdf . – Электрон. версия печ. публикации, 2002. – PDF формат, версия 1.4 . – Систем. требования: Adobe Acrobat 5.0 и выше.74.Блохин А.В. Теория эксперимента [Электронный ресур]: Курс лекций в двух частях: Часть 2. – Электрон. текст. дан. (1,0 Мб). – Мн.: Научно-методический центр “Электронная книга БГУ”, 2003. – Режим доступа: http://anubis.bsu.by/publications/elresources/Chemistry/blohin2.pdf . – Электрон. версия печ. публикации, 2002. – PDF формат, версия 1.4 . – Систем. требования: Adobe Acrobat 5.0 и выше.75. Гланц С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц; под ред. Н.Е. Бузикашвили, Д.В. Самойлова; пер. с англ. Ю.А. Данилова. М.: Практика, 2001. – 459 с.76. Герасимов И.Г. Взаимосвязь между показателями гемодинамики и дыхания у человека / И.Г. Герасимов, Е.В. Самохин // Физиология человека. 2003. – № 4. – С. 72 – 75.77.Данилова Л.А. Анализы крови и мочи. – 4-е изд., исправ. – СПб.: Салит-Медкнига, 2003. – 128 с.78.Козинец Г.И. Интерпретация анализов крови и мочи и их клиническое значение / Г.И. Козинец. – Москва: «Триада – Х», 1998. – 104 с.79. Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича. – М.: Медицина. 1977. – С. 64 – 68.80. Терехов И.В., Громов М.С., Дзюба М.А. и др. Влияние сверх-высокочастотного излучения нетепловой интенсивности на выраженность адреналинового отека легких и выживаемость крыс в эксперименте// Вестник Нижегородскою университета им. Н.И. Лобачевского. – 2011.—№ 1.- С. 117-122.81.Определение показателей гемостаза на программируемом оптико-механическом коагулометре Минилаб 704 [Электронный ресурс]. Режим доступа: http://www.coagulometers.ru/minilab704.htm82. Шипов А.А. Липидный обмен и реологические свойства крови при изменениях водного обмена в легких: Автореф. дис. ...канд. биол. наук.— Ярославль, 2008. – 24 с.83. STAT FAX® 3300 Биохимический анализатор. Руководство пользователя. AWARENESS Technology Inc. [Электронный ресурс]. Режим доступа: http://www.awareness.ru/support/show/1184МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫИсследование было построено по принципу «опыт – контроль». Животных опытных и контрольных групп подвергали однотипному клиническому обследованию. Все манипуляции соответствовали этическим нормами и правилам работы с лабораторными животными.В качестве подопытных животных были выбраны 30 крыс (самки линии Wistar, весом 150 – 200 г). Все животные были подразделены на четыре группы: интактная группа (И-группа);контрольная группа (К-группа), которой вводили физиологический раствор в концентрации 0,1 мг/кг;опытная группа (АДР-группа), которой вводили адреналин в концентрации 0,1 мг/кг;опытная группа (АДР+АП-группа), которой вводили адреналин в концентрации 0,1 мг/кг, а затем проводили ингаляции Апингалином в течение 10 последующих дней. Забор крови у крыс осуществляли из подъязычной вены в 2 пробирки с антикоагулянтом (1 мл цитрата натрия). Выделение плазмы крови крыс проводили с помощью центрифугирования в течение 15 мин при скорости 3000 об/мин, сыворотки – 1500 об/мин.Уровень белка и белковых фракций позволяет диагностировать различные сдвиги в состоянии организма, а потому в число контролируемых показателей мы выбрали содержание общего белка и изменений концентраций альбумина и фибриногена в крови подопытных животных. Кроме того, надежным маркером состояния организма являются продукты азотистого обмена. Преобладающим компонентом среди них является мочевина. Креатин и креатинин — метаболиты, которые образуются преимущественно в клетках мышц. Так, креатинин непрерывно образуется в мышцах из креатинфосфата; процесс этот протекает без участия ферментов. Поскольку креатинин не может быть превращен обратно в креатин, а также благодаря тому, что попадающий в кровоток креатинин активно секретируется в мочу, он быстро и необратимо выводится сразу же по мере образования. В отличие от креатинина креатин может быть повторно использован для синтеза креатинфосфата; сохранение креатина в организме обеспечивается его обратным всасыванием в почечных канальцах. А потому мы сочли важным проконтролировать изменение этих показателей при оценке влияния на организм подопытных животных как адреналина, так и препарата «Апингалин», для которого мы беремся доказать нивелирующие по отношения к адреналину действие.Определение показателей общего белка, альбумина, креатинина и мочевины в сыворотке крови проводили с помощью биохимического анализатора Stat Fax 3300 (производство США) по прилагаемой производителем методике с использованием проточной кюветы. Использовались следующие расходные материалы:- UREA-B (Испания),- CREATANINE-J (Испания),- TOTAL PROTEIN (Испания),- ALBUMINE (Испания).Определение фибриногена проводили на анализаторе показателей гемостаза АПГ4-01 Минилаб-704 по запрограммированной методике определения концентрации фибриногена по методу Клаусса (в г/л) при оптическом режиме работы (определение по изменению коэффициента пропускания света содержимым кюветы) с использованием набора Тех-Фибриноген-тест (производитель ООО ФИРМА «ТЕХНОЛОГИЯ-СТАНДАРТ», Россия, Барнаул). Метод основан на том, что при добавлении избытка тромбина к разбавленной плазме (обычно 1:10) скорость образования сгустка прямо пропорциональна концентрации фибриногена. Как правило, в реактив добавляют инактиватор гепарина. К достоинствам данного метода можно отнести быстрое получение результата, позволяющее применять его как для серийных, так и для одиночных экспресс исследований. Основные недостатки: - высокая чувствительность к ингибиторам полимеризации фибриногена (ПДФ и др.), которые могут занижать результат. - сравнительно узкий «рабочий диапазон», который зависит от типа коагулометра, для большинства приборов разница между минимальной и максимальной определяемой концентрацией не превышает 3 4 раза. Статистическую обработку данных проводили с использованием стандартных статистических методов. Проверку на нормальность распределения дат проводили с использованием критерия Шапиро-Уилка W. Практически все даты имели нормальное распределение. Сравнение средних арифметических проводили с помощью t-критерия Стьюдента. Различия считали статистически значимым при p < 0,05. Для составления базы данных результатов исследования и проведения их статистической обработки применяли пакет программ Excel, STATISTICA 10, Past. Данные в таблице представлены как среднее арифметическое и стандартная ошибка среднего арифметического.РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯСреди причин, вызывающих изменение нормального гомеостаза, одно из главных мест занимает эндогенная интоксикация, которая может сопутствовать основному заболеванию и нередко служит причиной смертельных исходов. И до сих пор не найдены методы, которые помогли бы эффективно бороться с этим явлением и его последствиями при лечении заболеваний дыхательной системы, в частности отека легких. Разработка и внедрение систем детоксикации организма природного происхождения – один из актуальных путей лечения эндогенной интоксикации. При этом продукты пчеловодства и препараты на их основе, такие как маточное молочко и прополис, занимают ведущее положение благодаря своим антиоксидантным, противовоспалительным, биостимулирующим и другими свойствам (Анашкина и др., 2011). Терапия синтетическими препаратами чревата развитием побочных эффектов и осложнений, кроме того, частенько она оказывается неэффективной. Этим объясняется необходимость поиска новых методов и средств организации здоровья, профилактики и лечения заболеваний человека на основе исследования физиологической активности и внедрения в практику природных соединений. Одним из таких направлений является апитерапия, т.е. лечение заболеваний человека пчелоужалениями и продуктами пчеловодства – медом, прополисом, маточным молочком, пыльцой, пергой, воском, пчелиным ядом (Крылов и др., 2015).Продукты пчеловодства обладают целым рядом ценнейших свойств: противомикробным, биостимулирующим, противовоспалительным, анестезирующим, радиопротекторным и др. Это связано с тем, что пчелы для своего жизнеобеспечения собирают в улей и перерабатывают наиболее ценные природные вещества как по качеству, так и по концентрации, так как при минимуме веса, приносимого в улей по воздуху нектара, пыльцы цветов и прополиса являются непревзойденными питательным веществами как для самой пчелы, так и для человек. Человек, умело отбирая часть продукции пчел, пользуется готовой технологической переработкой осуществляемых пчелами и усовершенствует ее только в плане создания еще более универсальных пищевых добавок и косметических средств. Комбинируя энергетическую и микроэлементарную составляющую меда с пластической составляющей пыльцы и маточного молочка можно получить высокоэффективную смесь, позволяющую обеспечить полноценный пищевой рацион человеческого организма способствующий улучшению внутренних и внешних показателей здоровья (Крылов, Сокольский, 2006).Наряду с широким применением в апитерапии пчелиного яда (Крылов, 2012), в гораздо меньшей степени используются такие высокоактивные продукты, как прополис и маточное молочко пчел. Это объясняется, с одной стороны их меньшей изученностью, а с другой трудностями, связанными с их введением в организм, поскольку они имеют сложный, многокомпонентный состав. Основной особенностью этих компонентов является их различное отношение к растворимости: часть веществ растворимы в воде и образуют истинные растворы, доступные для поступления в организм, другая часть веществ растворяется только в высококонцентрированных растворителях например, флаваноиды прополиса и жирные кислоты маточного молочка) и не может быть непосредственно применена для парентерального введения в организм (Крылов, Сокольский, 2006).Обрабатывая пергу, рабочие пчелы вырабатывают глоточными железами особое высокопитательное вещество для вскармливания личинку будущей матки, называемое маточным молочком. Для медицинских целей его добывают из незапечатанных маточников, закладываемых пчелами летом, при отборе из них маток. Высокая биологическая активность маточного молочка объясняется в первую очередь его составом. Остановимся только на некоторых его компонентах, представляющихся наибольшую значимость для объяснения высокого оздоровительного действия этого продукта на организм в первую очередь с точки зрения белкового обмена. В состав маточного молочка входит множество микроэлементов, но присутствие в нем именно железа, марганца, цинка и кобальта обеспечивает нормализацию кроветворения. В маточном молочке обнаружен ряд биологически активных веществ, (например, ацетилхолин и холинэстераза, разрушающая его). Из аминокислот – а надо отметить, что маточное молочко содержит все незаменимы аминокислоты – наибольший интерес представляет гаммаглобулин, составляющий основную часть протеинов, выполняющих противобактерийные, противовирусные и антитоксические функции. Кроме того, в протеиновой группе маточного молочка содержится гелантин аминокислота, являющаяся компонентом холагена. Будучи неотъемлемым элементом мезенхиматозной структуры ретикуло-эндотелиальной системы, холаген восстанавливает трофизм живых клеток, поэтому его содержание отражается на замедлении старения организма. Если говорить о протеиновой составляющей маточного молочка, нельзя не упомянуть о содержащихся в нем глобулинах (68 %), и альбуминах (40 %), которые являются важнейшими компонентами крови. Белки маточного молочка аналогичны белкам крови человека, а аминокислотный состав идентичен мясу, молоку, яйцам, но при этом они содержат значительно больше глютаминовой и аспарагиновой кислоты, лизина и пролина. В маточном молочке выявлены инсулиноподобные пептиды, цинк-белок с гормоноподобной деятельностью. В маточном молочке обнаружены и нуклеиновые кислоты: рибонуклеиновая кислота (РНК) и дезоксирибонуклеиновая кислота (ДНК), РНК содержится в сравнительно большем количестве не только в свежем маточном молочке, но и сохраняется в нем при длительном хранении. ДНК обнаруживается лишь в наивном (свежем) маточном молочке. Из маточного молочка выделены также и ферменты, принимающие участие в обмене нуклеиновых кислот (Дубцова, 2009; Ахмерова и др, 2011).Лечебный эффект маточного молочка основан на его неспецифическом действии. Благодаря богатому содержанию в нем самых разнообразных веществ (белков, микроэлементов, а так же целого комплекса витаминов, особенно комплекса В), маточное молочко оказывает на организм общее тонизирующее действие, повышает обмен веществ, улучшает кроветворение, пищеварение, деятельность сердца, желез внутренней секреции и др. (Дубцова, 2009; Ахмерова и др., 2011).Источником прополиса являются смолистые вещества, собираемые пчелами с различных растений. Смолистые вещества, являющиеся защитными выделениями растений, пчелы-сборщицы переносят на своих ножках так же, как и пыльцу. В улье они обрабатывают принесенное вещество, секретом челюстных желез, добавляя к массе воск в соотношении 2:1, растительную смолу и пыльцу-обножку. Химический состав прополиса сложен и непостоянен, так как собирается с различных растений. В нем содержится 55 % смол и бальзамов, 10 % эфирных масел, до 30 % воска и 5 % пыльцы. Такой состав вполне объясняет, почему прополис хорошо растворяется в спирте и плохо в воде. За счет пыльцы прополис богат минеральными веществами, витаминами и микроэлементами. Кроме того, в нем содержится большое количество фитонцидов, эфирных масел, бальзамоподобных веществ, спиртов, гликозидов, полисахаридов, дубильных веществ, флавоноидов. Главным биологически активным веществом прополиса является артипиллин С. Прополис стимулирует трофические и регенеративные функции организма, укрепляет иммунную систему. Под влиянием прополиса усиливается фагоцитоз, увеличивается содержание защитного белка пропедина и комплемента, повышает уровень гаммаглобулина, энергичнее идет выработка специфических антител против разнообразных микроорганизмов и их токсинов (Омаров, 2009). Основные составляющие прополиса это гликозиды, смолобальзамические, дубильные вещества и флавониды, обладающие мощной антиоксидантной активностью, за счет чего прополис обладает выраженным противоопухолевым эффектом, подавляет рост раковых клеток, а так же является мощным радиопротектором. Не оказывая отрицательного действия на организм, прополис способствует выведению из организма ядов и замедляет процессы старения. Прополис участвует в регуляции эндокринной системы, влияет на кору надпочечников, гипофиз, щитовидную железу, эффективен при лечении диффузного и узлового зоба. Среди препаратов, создаваемых на основе описанных выше продуктов пчеловодства, особый интерес представляет препарат «Апингалин», разработанный на кафедре физиологии и биохимии человека и животных Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского (патент РФ 21740002 от 15.09.2000) – водно-спиртовая суспензия маточного молочка и прополиса.