Скрининг новых антибиотикорезистентных штаммов лактобацилл.

Содержание
1)Понятие об АБ (антибиотик). Механизмы АБ-резистентности у бактерий (особенно у лактобацилл). 3
2)Методы определения чувствительности микроорганизмов к АБ 15
Список литературы 21

Например,  для  определения  МИК  тетрациклина  в  отношении  культуры Staphylococcus aureus , выделенной от больного,  готовят двукратно убывающие концентрации этого антибиотика в стандартном питательном  бульоне (Бульон  Мюллера-Хинтона).  Контролями  культуры  и  антибиотика  являются, соответственно, бульон без антибиотика и бульон с первым разведением антибиотика. В опытные и контрольные пробирки вносят стандартизованную суспензию молодой агаровой культуры  S. aureus и после суточной инкубации учитывают результат. Учетным признаком является наличие или отсутствие мутности бульона (роста культуры) в пробирках[4]. В  контроле культуры должна быть мутность, в контроле антибиотика - нет. Величина МИК соответствует той минимальной концентрации тетрациклина, при которой отсутствует мутность (бульон в пробирке прозрачен). Серийные  разведения  в  плотных  средах (Агар  Мюллера-Хинтона,  М173)  чаще  используют  для одновременного тестирования большого количества микробных штаммов (для посева можно использовать специальный штамп-репликатор). Учетным признаком в этом случае является наличие или отсутствие роста на поверхности агара. Метод серийных разведений нередко считают наиболее точным, хотя и относительно трудоемким,  дорогим. В действительности, при правильной постановке и соответствующих контролях диффузионные методы в ряде случаев не уступают ему по точности. Вместе с тем методом серийных разведений можно тестировать чувствительность более широкого круга микроорганизмов (включая анаэробные, медленно-растущие и прихотливые).Диско-диффузионный метод При определении чувствительности методом диффузии в агар чистую культуру возбудителя засевают «газоном» на питательный агар в чашке, например, тампоном, смоченном в стандартизованной (108 КОЕ/мл) суспензии  микроорганизма.  Затем  на  поверхность  агара  укладывают  стандартные  бумажные  диски, пропитанные антибиотиками, которые диффундируют в агар, создавая градиент концентрации. На чашку диаметром 90 мм равномерно укладывают 6-7 дисков. После инкубирования в термостате измеряют диаметры  зон  задержки  роста  вокруг  дисков  и  по  специальным  таблицам  определяют  степень чувствительности к тому или иному антибиотику (рис. 4). Рис. 4.  Определение  антибиотикочувствительности диско-диффузионным методомСуществует линейная связь между логарифмом МИК, измеренной при использовании метода серийных разведений, и диаметром зоны задержки роста при использовании диско-диффузионного метода (рис. 5). Рис. 5. Графическое изображение взаимосвязи между Iog2 МИК и диаметром зоны задержки роста, полученным с помощью диско-диффузионного метода при  использовании  дисков, содержащих  аналогичную  концентрацию антибиотикаПоскольку для получения результатов методом диффузии в агаре используют стандартизованные условия (состав и количество среды, количество засеваемых микробов, температура и сроки инкубирования, стандартные диски и др.), каждому значению диаметра зоны вокруг диска с антибиотиком соответствует определенное значение МИК. Исходя из значения МИК, можно определить терапевтический индекс: Т=МИК/К (см. выше).  Следовательно, по диаметру зоны можно определить степень чувствительности к тому или иному антибиотику: чувствительные (S), умеренно-устойчивые (I) и устойчивые (R). К  категории S (от англ. sensitive, чувствительный) относят те, для которых использование средних терапевтических доз будет достаточным для трехкратного превышения МИК.  В  категорию I (от англ. intermediate, промежуточный) относят те микробы, для подавления которых потребуются максимальные терапевтические дозы. Категорию R (от англ.  resistant, устойчивый) составляют те микроорганизмы, в отношении которых данный антибиотик будет неэффективным in vivo (см. выше). Таким образом, определение антибиотико-чувствительности методом серийных разведений и диско- диффузионным методом основаны на одном принципе - сравнении величины МИК для данного микроба со средней концентрацией антибиотика в сыворотке   крови. Различие в том, что в первом случае МИК  определяют непосредственно в опыте, а во втором случае определяют величину зоны задержки роста, как эквивалент  МИК,  поэтому  цепочка  расчетов  несколько  длиннее:  диаметр-МИК-Т-категория чувствительности. Диско-диффузионный метод более прост, дешев и гибок в работе, хотя и имеет свои ограничения[7. 12]. Другие методы Промежуточное положение между двумя вышеописанными методами занимает метод определения чувствительности  с  помощью  Е-тестов (E-test).  Последние  представляют  собой  бумажные  полоски, пропитанные не одной, а рядом убывающих концентраций определенного антибиотика (128, 64, 32, 16, 8, 4, ...мкг/мл).  Е-тесты,  подобно  дискам  при  диско-диффузионном  методе,  укладывают  на  поверхность стандартного  питательного  агара,  засеянного  испытуемой  культурой  в  виде «газона».  В  результате диффузии антибиотик формирует в агаре эллипсовидную зону градиента концентраций: более широкую в области высоких концентраций и более узкую — в области  низких. После инкубирования вокруг полоски формируется эллипсовидная зона задержки роста, которая, сужается в области малых концентраций и «пересекает» полоску на уровне, соответствующем величине МИК (рис. 6). Тот же принцип используется при определении чувствительности методом стрипов ХайКомб.   Рис. 6. Схема постановки Е-теста (стрелкой показано место пересечения зоны задержки  роста с полоской; значение МИК антибиотика – 1,0 мкг/мл).При массовых исследованиях используют автоматизированные методы определения чувствительности к антибиотикам. Это позволяет упростить и ускорить проведение исследования. Наиболее часто применяют метод серийных разведений в планшетах и метод пограничных концентраций (микрометоды)[11]. Список литературыИ.М.Абдуллин Антибиотики в клинической практике, Саламат, 1997 Катцунга Б.Г Базисная и клиническая фармакология, Бином;СПб.:Нев.Диалект, 2000.Альберт А. Избирательная токсичность. Физико-химические основы терапии: в двух томах / Пер. с англ. М.: Медицина, 1989.Альбертс Б., Брей Д., Льюис Дж. с соавт. Молекулярная биология клетки: в двух томах. М.: Мир, 1994.Белоусов Ю.Б., Моисеев В.С., Лепахин В.К. Клиническая фармакология и фармакотерапия. Руководство для врачей. М.: Универсум Паблишинг, 1997.Гаузе Г.Ф. Молекулярные основы действия антибиотиков. /Пер. с англ. М.: “Мир", 1975.Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. М.: Высшая школа, 1986.Елинов Н.П. Химическая микробиология. М.: Высшая школа, 1989.М.Д. Машковский. Лекарственные средства. М., 1993, т.1, с.313-314.Материалы научно-практической конференции “Антибактериальные препараты в практике терапевта". СПб., 16-17 мая 2000.Михайлов И.Б. Клиническая фармакология. СПб.: Фолиант, 1999.Страчунский Л.С., Козлов С.Н. Антибиотики: клиническая фармакология. Смоленск: Амипресс, 1994.Яковлев В.П. Антибактериальная химиотерапия в неинфекционной клинике: новые беталактамы, монобактамы и хинолоны. // Итоги науки и техники. Москва, 1992, 201 стр.Tavakoli N., Comanducci A., Dodd H.M. et al. IS1294, a DNA element that transposes by RC transposition // Plasmid. — 2000. — V. 44, № 1. — P. 66–84. Toleman M.A., Bennett P.M., Walsh T. Common regions e.g. orf513 and antibiotic resistance: IS91-like elements evolving complex class 1 integrons // J. Antimicrob. Chemother. — 2006. — V. 58. — P. 1–6. Woods J.B. Antimicrobials for biological warfare agents // Biological weapons defense. N.J., — 2005. — P. 285–315. Yim G., Wang H.H. Davies J. Antibiotics as signaling molecules // Phil. Trans. R. Soc. B. — 2007. — V. 362. — P. 1195–1200.