Рекомендуемая категория для самостоятельной подготовки:
Дипломная работа*
| Код |
564469 |
| Дата создания |
2022 |
| Страниц |
62
|
Мы сможем обработать ваш заказ (!) 18 ноября в 12:00 [мск] Файлы будут доступны для скачивания только после обработки заказа.
|
Содержание
Оглавление
Введение………………………………………………...…….….…….4
Глава 1. Применение спектроскопических методов в исследованиях структуры и свойств белков (литературный обзор).………………………6
§1.1. Физические основы флуоресцентной спектроскопии……………..…..…6
§1.2. Тушение флуоресценции. Уравнение Штерна – Фольмера………....….8
§1.3. Основы спектроскопии комбинационного рассеяния…………………..11
§1.4. Наномаркеры семейства флуоресцеина………………………………….14
§1.5. Применение флуоресцентной спектроскопии и КР – спеткроскопии в исследованиях белковых макромолекул………………………………..…….. 17
Глава 2. Методическая часть эксперимента………………………………22
§2.1. Приготовление растворов сывороточного альбумин человека и наномаркеров для изучения констант связывания наномаркеров с белком методом флуоресцентной спектроскопии ………………………..……………22
§2.2. Приготовление растворов сывороточного альбумин человека и наномаркеров для изучения изменений вторичной структуры белка методом КР - спектроскопии ………………………………………………………….….22 §2.3. Методика экспериментов на флуориметре для исследования констант
связывания наномаркеров с сывороточным альбумином человека…………………..……………………………...……………………….23
§2.4. Методика экспериментов на КР – спектрометре для исследования вторичной структуры сывороточного альбумина человека при связывании им наномаркеров семейства флуоресцеина…………..……………………..……..23
Глава 3. Исследование взаимодействия наномаркеров семейства флуоресцеина с сывороточным альбумином человека (описание собственных результатов и их обсуждение)……………….…………. ……25
§3.1 Исследование флуоресцентных характеристик наномаркеров семейства флуоресцеина в растворах сывороточного альбумина человека при различных значениях pH……………………………………….…………….…25
§3.2 Определение констант химического связывания наномаркеров семейства флуоресцеина с сывороточным альбумином человека при различных значениях pH…………………………………………………..……35
§3.3 Исследование изменений вторичной структуры сывороточного альбумина человека при связывании им наномаркеров семейства флуоресцеина при различных значениях pH…………………………….……48
Основные результаты и выводы……………...…………………..59
Список цитируемой литературы………………………..…………60
Введение
Введение
Использование методов оптики и спектроскопии для исследовательских задач биологических систем является одной из важнейших задач современной физики. В настоящее время оптико-спектральные методы широко применяются для исследования функций и структуры биологических молекул, например, компонентов крови.
Объектом исследования в данной работе является сывороточный альбумин человека. Сывороточный альбумин человека представляет собой глобулярный белок, выполняющий в плазме крови транспортные функции. Многие лекарственные препараты в кровеносном русле связываются с альбумином.
Анализ механизма связывания сывороточного альбумина человека с различными лигандами чрезвычайно интересен с точки зрения биомедицины.
При этом широко используются флуоресцентные наномаркеры. Для исследования белков плазмы крови обычно используются анионные наномаркеры (при физиологическом значении рН 7,4) – такие как эозин, флуоресцеин и эритрозин, принадлежащие к одному гомологическому ряду производных флуоресцеина.
Основой взаимодействий молекулы сывороточного альбумина человека с лигандами является структурная подвижность этой белковой молекулы, обеспеченная уникальной петлевой укладкой единственной полипептидной цепи белка из 585 аминокислотных остатков. Вторичная структура сывороточного альбумина человека состоит из-спиральных участков и участков хаотической укладки: например при физиологическом значении pH около 50 – 67 % аминокислотных остатков уложены в-спирали. В неспирализованных участках белковая цепь изгибается. Между остатками цистеина в сывороточном альбумине человека образуются 17 дисульфидных связей, которые формируют 9 петель.
В результате гидрофобных взаимодействий каждые три выше указанные петли образуют глобулярную структуру. Такая структурная единица альбумина называется доменом. Молекула сывороточного альбумина человека состоит из 3 практически одинаковых доменов. На сегодняшний день преобладает модель «сердца» третичной структуры альбумина, домены в этой модели расположены под углом друг к другу.
При связывании лигандов в молекуле сывороточного альбумина человека происходят конформационные перестройки, которые могут быть довольно значительными. Конформационные перестройки возможны как во всей молекуле альбумина, так и только в связывающей области.
КР - спектроскопия обширно применяется в биологических и медицинских исследованиях. Именно КР – спектроскопия ближней инфракрасной области позволяет исследовать механизм связывания данных наномаркеров с белком.
Данная работа посвящена исследованию флуоресцентных характеристик наномаркеров семейства флуоресцеина в растворах сывороточного альбумина человека при различных значениях pH. Также в работе определены константы химического связывания наномаркеров семейства флуоресцеина с сывороточным альбумином человека при различных значениях pH. Методом КР – спектроскопии в работе исследованы изменения вторичной структуры сывороточного альбумина человека при связывании им наномаркеров семейства флуоресцеина при различных значениях pH.
Результаты исследования спектроскопическими методами связывания наномаркеров с сывороточным альбумином человека при различных значениях рН представляют интерес не только с точки зрения оптико-спектральных методов изучения сложных макромолекулярных систем, но и с точки зрения прикладных биологических задач.
Фрагмент работы для ознакомления
Добрый день! Уважаемые студенты, Вашему вниманию представляется дипломная работа на тему: «СПЕКТРОСКОПИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ НАНОМАРКЕРОВ СЕМЕЙСТВА ФЛУОРЕСЦЕИНА С АЛЬБУМИНОМ ЧЕЛОВЕКА»
Список литературы
Список литературы
1. Л.В. Левшин, А.М. Салецкий «Оптические методы исследования молекулярных систем», 1994 год, Издательство Московского университета.
2. Дж. Лакович «Основы флуоресцентной спектроскопии», М.: Мир, 1986.
3. Ю.А. Пентин, Л.В. Вилков «Физичесие методы исследования в химии», 2003 год, Издательство «АСТ».
4. Г.Е. Добрецов, «Флуоресцентные зонды в исследованиях клеток, мембран
и липопротеинов», 1989 год, Издательство «Наука».
5. И.М. Власова, А.М. Салецкий «Кр-спектроскопия в сравнительных исследованиях механизмов связывания трех молекулярных зондов – флуоресцеина, эозина и эритрозина – с сывороточным альбумином человека», Laser Physics Letters, 2008, №11, 834-839.
6. И.М. Власова, Д.В Полянский, Салецкий А.М. «Исследование методом спектроскопии комбинационного рассеяния света механизма связывания сывороточного альбумина человека с молекулярным зондом эозином »,
Laser Physics Letters, 2006, № 5, 390-394.
7. И.М. Власова, А.М. Салецкий «Спектроскопия комбинационного рассеяния света в исследованиях механизма связывания сывороточного альбумина человека с молекулярным зондом флуоресцеином», Laser Physics Letters, 2008, № 5, 384-389.
8. Е.М. Бухарова, И.М. Власова, А.М. Салецкий «Структура молекулярных ассоциатов флуоресцентных зондов в растворах сывороточного альбумина человека», Журнал прикладной спектроскопии, 2008, том 75, №6, 783-788.
9. X. Diaz, E. Aduin, E. Lissi «Quenching of BSA intrinsic fluorescence by
alkylpyridinium cations Its relationship to surfactant-protein association», Journal of Photochemistry and Photobiology, 2002, 157-162.
10. Liliana Birla, Ana-Maria Cristian, Mihaela Hillebrand, «Absorption and
steady state fluorescence study of interaction between eosin and bovine serum albumin», Journal «Spectrochimica Acta», 2003, 551-556.
11. S.M.T. Shaikh, J. Seethamappa, P.B. Kandagal, D.H. Manjunatha, S. Ashoka «Spectroscopic investigations on the mechanism of interaction of bioactive dye with bovine serum albumin», Journal «Dyes and pigments», 2006, 1-6.
12. Sang Hak Lee, Jung Kee Suh,and Ming Li «Determinetion of Bovine Serum Albumin by Its Enhancement Effect of Nile Blue Fluorescence»,Bull. Korean Chem. Soc.,2003, vol. 24,№1, 45-48.
13. Sebnem Ercelen, Andrey S., Klymchenko, Alexandr P. Demchenko «Novel
two-color fluorescence probe with extreme specificity to bovine serum albumin, FEBS Letters, 2002, 25-28.
14. H. Yamini Shrivastava, Balachandran Unni Nair «A fluorescence-based assay
for nanogramquantification of proteins using a protein binding ligand», Original Paper, 2002, 169-174.
15. И.М. Власова, А.М. Салецкий «Флуоресцентные характеристики зондов семейства флуоресцеина в растворах сывороточного альбумина», Вестник Московского университета, Серия 3, № 4, 2009 год, С.52-56.
16. А.Д. Дергунов, Ю.Ю. Воротникова «Взаимодействие сывороточного альбумина с апобелком Е и липопротеидами очень низкой плотности плазмы крови человека», Биохимия. 1993. Т. 58, вып. 6. С. 944-952.
17. А. Г. Мельников, А. М. Салецкий, В. И. Кочубей, А. Б. Правдин, И. С. Курчатов, Г. В. Мельников «Триплет – триплетный перенос энергии между люминесцентными зондами, связанными с альбуминами», Оптика
и спектроскопия, том 109, № 2, 2010, С. 216-221.
18. И.М. Власова, А.Ю. Землянский А.М. Салецкий «Спектрально-люминисцентные характеристики эозина в растворах сывороточного
альбумина человека при его денатурации под воздействием додецилсульфата натрия», Журнал прикладной спектроскопии, 2006, том 73, №5, стр: 661-665.
19. И.М. Власова, А.М. Салецкий «Флуоресценция молекулярного зонда эозина в растворах сывороточного альбумина человека с органическими и неорганическими лигандами», Химическая физика, 2008, том 27, №4, стр:60-64.
20. А.М. Салецкий, А.Г. Мельников, А. Б. Правдин, В.И. Кочубей «Структурные изменения в сывороточном альбумине человека по данным кинетики фосфоресценции люминесцентного зонда - эозина», Журнал прикладной спектроскопии, 2005, том 72, №5, стр:660-663.
Пожалуйста, внимательно изучайте содержание и фрагменты работы. Деньги за приобретённые готовые работы по причине несоответствия данной работы вашим требованиям или её уникальности не возвращаются.
* Категория работы носит оценочный характер в соответствии с качественными и количественными параметрами предоставляемого материала. Данный материал ни целиком, ни любая из его частей не является готовым научным трудом, выпускной квалификационной работой, научным докладом или иной работой, предусмотренной государственной системой научной аттестации или необходимой для прохождения промежуточной или итоговой аттестации. Данный материал представляет собой субъективный результат обработки, структурирования и форматирования собранной его автором информации и предназначен, прежде всего, для использования в качестве источника для самостоятельной подготовки работы указанной тематики.
bmt: 0.00346