ВЛИЯНИЕ ОБРАБОТАННЫХ В ПЛАЗМЕ ТЛЕЮЩЕГО РАЗРЯДА АДАМАНТАНА И ЕГО НИТРОПРОИЗВОДНЫХ НА ХАРАКТЕР РОСТА И ФЕРМЕНТАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ ASPERGILLUS NIGER

Работа состоит из двух частей теоретической и экспериментальной. Эксперимент уникальный был проведен совместно с кафедрой физики и органической химии. Есть таблицы и диаграммы. Защищалась на отлично ...

ВВЕДЕНИЕ 3
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 7
1.1. Морфо-функциональные характеристики Aspergillus niger 7
1.2. Физиолого-биохимическая характеристика Aspergillus niger 10
1.3. Характеристика современных антифунгальных средств 14
1.4. Адамантан и его нитропроизводные, как класс антифунгальных веществ 17
1.5. Плазмополимеризованные пленки и их свойства 20
1.6. Применение фрактального анализа как способа оценки морфологических характеристик живых объектов 22
2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 24
2.1. Материалы и методы исследования 24
2.2. Результаты исследований и обсуждение 31
ВЫВОДЫ 46
СПИСОК ИСТОЧНИКОВ ЛИТЕРАТУРЫ 48
ПРИЛОЖЕНИЯ 54

Актуальность работы. В последние годы многие исследования были направлены на поиск связи между физико-химическими свойствами и биологической активностью соединений. Актуальной задачей на сегодня является изучение адамантана и его производных, обладающих определённым типом биологической активности. Перспективность применения производных адамантана обусловливается набором специфических свойств: относительно большой размер адамантильного радикала (его диаметр составляет 5Å), высокая липофильность (растворимость в неполярных растворителях), конформационная жесткость. Последние два свойства особенно важны при создании новых лекарственных препаратов. Введение адамантильного радикала повышает, в целом, термическую стабильность вещества и его стойкость к окислению и радиационному облучению, что ва жно, в частности, при получении полимеров со специфическими свойствами [30, 54].
Все это стимулировало широкомасштабный поиск новых лекарственных препаратов на основе адамантана. Так, препараты ремантадин (гидрохлорид 1-(1-адамантил)этиламина), и адапромин (α-пропил-1-адамантил-этиламина гидрохлорид) используются как лекарства при эффективной профилактике вирусных инфекций [37], а амантадин (гидрохлорид 1-аминоадамантана) и глудантан (глюкуронид 1-аминоадамантана) эффективны при паркинсонизме, порождаемом различными причинами, в частности, при нейролептическом и посттравматическом синдроме [25]. Полимерные аналоги адамантана запатентованы как противовирусные соединения, в том числе, в отношении ВИЧ [43]. Замещенные амиды адамантанкарбоновой кислоты могут служить снотворными средствами. Введение адамантильного остатка в 2-оксинафтохинон приводит к получению антималярийных препаратов. Адамантиламиноспирты и их соли обладают выраженным психостимулирующим действием и при этом малотоксичные [39].
Для многих производных адамантана доказано наличие антифунгальной активности, поэтому особый интерес представляет изучение новых соединений данной группы на наличие большего эффекта и меньшей токсичности для человека [10, 11, 16, 17]. При использовании этих веществ в качестве лекарственного препарата для наружного применения целесообразным может оказаться иммобилизация действующего соединения на поверхность перевязочного материала для удобства применения [14].
Было исследовано влияние плазмохимической полимеризации в тлеющем разряде (PCVD) на биологическую активность нитропроизводных адамантана. PCVD обработка изменяет свойства соединений за счет образования свободных радикалов, изменения гидрофильно-гидрофобных свойств поверхности, меняется рельеф и пространственная геометрия, при такой обработке наблюдается маленький расход вещества и прочность получаемого покрытия [56]. Возможно, перспективной будет являться обработка различных строительных материалов таких как, пластиковые трубы и панели, керамическая плитка для придания им антифунгальных свойств, что защитит их от биоповреждений.
Объектом исследования неслучайно был выбран Aspergillus niger. Микромицеты – контаминанты жилых и производственных помещений − как фактор риска развития инвазивных микозов в настоящее время изучены еще недостаточно. Всё чаще регистрируются случаи заболевания инвазивным аспергиллезом легких и придаточных пазух носа. Возбудителем во всех случаях был Aspergillus niger, также обнаруженный в помещениях, в которых находились больные до этого в течение длительного времени [26].
В России частота грибкового поражения достигает 26-27% среди всех отитов у детей и 18 % у взрослых. По данным Московского НИИ уха, горла и носа, это заболевание встречается у 50 % всех больных с микозами ЛОР-органов. Чаще всего при отомикозе из наружного слухового прохода выделяют Aspergillus niger. Среди всех наружных отитов отомикоз встречается в 10 % наблюдений [28].
Целью настоящего исследования стало изучение антифунгальных свойств нитропроизводных адамантана активированных плазмохимической обработкой.
В связи с этим были поставлены следующие задачи:
1. Исследовать действия нитропроизводных адамантана активированных плазмохимической обработкой на площадь роста Aspergillus niger.
2. Исследовать действия нитропроизводных адамантана активированных плазмохимической обработкой на фрактальную размерность Aspergillus niger.
3. Оценить влияние нитропроизводных адамантана обработанных плазмохимически на количество водорастворимых белков в колониях Aspergillus niger.
4. Изучить протеолитическую активность в колониях Aspergillus niger при действии адамантана и его нитропроизводных в тех же условиях.
5. Изучить общую дегидрогеназную активность в колониях Aspergillus niger при действии адамантана и его нитропроизводных в тех же условиях.
6. Изучить амилолитическую активность в колониях Aspergillus niger при действии адамантана и его нитропроизводных в тех же условиях.
7. Изучить каталазную активность в колониях Aspergillus niger при действии адамантана и его нитропроизводных в тех же условиях.
Апробация работы.
Результаты исследования были представлены на XLII научной конференции студентов прошедшей 4-9 апреля 2011.

10 ± 1
9 ± 1
25 ± 4
33 ± 3
3 вещество
8 ± 2
контроль
17 ± 2
23 ± 3
17 ± 2
23 ± 3
17 ± 2
23 ± 3
I исследуемое соединение и адамантан подавляет протеолитическую активность грибной культуры лишь при концентрации 200 мкг/мл. С использованием обработки плазмой наблюдается подавление протеолитической активности грибной культуры уже при времени обработки в 100 с, с увеличением времени эффект сохраняется.
В случае культивирования As. пiger на среде с добавлением II вещества в концентрации 100 мкг/мл наблюдалась протеолитическая активность, повышение концентрации до 150, 200 мкг/мл сопровождалось полным ингибированием активности протеолитических ферментов до нуля. Плазмохимическая обработка не подавляет протеолитическую активность тест-объекта и она остается на уровне контроля.
III исследуемое соединение подавляло протеолитическую активность тест-культуры во всех случаях, лишь при культивировании с дисками обработанными PCVD время обработки 600с наблюдалась небольшая активность, меньше, чем в контроле в 2 раза (Р < 0,01) (таблица 2.2).
Можно сделать вывод о том, что все исследуемые соединения обладают антифунгальным эффектом, выраженным в подавлении эндопротеолитической активности, при этом происходит прекращение белкового обмена, не происходит утилизация старых и денатурированных белков, следовательно, они не используются как материал для построения новых. Наиболее этот эффект выражен у вещества III, иммобилизация не уменьшает его противогрибковых свойств. Соединение II тоже обладает свойством подавлять эндопротеолитическую активность грибов, особенно в концентрации 150 и 200 мкг/мл. Обработка в плазме видимо разрушает это вещество и в опыте протеолитическая активность остается на высоком уровне. Противоположно обработка в плазме действует на I соединение и адамантан, она повышает антифунгальный эффект, протеолитическая активность у As. пiger при этом не обнаруживается.
Изучение количества водорастворимых белков, экстрагированных из 1 см2 грибной культуры As. пiger, выращенной на агаризированной среде с тест-дисками необработанными и обработанными плазмохимически, выявили достоверное отличие опыта, по сравнению с контролем (Р < 0,05) (рис. 2.7 и 2.8, приложение 5 и 6).
Рис. 2.7. Количество водорастворимых белков (мкг/мл) выделенных из грибных колоний As. niger при культивировании с исследуемыми веществами в концентрации 100,150 и 200 мкг/мл (определенное по методу Лоури)
При действии на тест-культуру всех исследуемых соединений наблюдался четкий дозозависимый эффект снижения количества водорастворимых белков. Самой действенной концентрацией для всех веществ была 200 мкг/мл. Наибольший эффект наблюдался у III исследуемого вещества, количество водорастворимого белка в грибной культуре 9 мкг/мл, наименьший эффект 25 мкг/мл у тест-культуры выращенной с I соединением, но даже этот показатель в 2 раза меньше, чем контроль – 50 мкг/мл (Р < 0,001) (рис. 2.7, приложение 5).
Рис. 2.8. Количество водорастворимых белков (мкг/мл) выделенных из грибных колоний As. niger при культивировании с исследуемыми веществами обработанными PCVD время обработки 100, 300 и 600 с (определенное по методу Лоури)
Обработка плазмой самый большой эффект оказывает на адамантан и I соединение − наблюдается экстремально высокий рост количества водорастворимых белков экстрагированных из грибной культуры по сравнению с контролем на 70 и 54%. Меньшее влияние обработка оказывает на III вещество − количество водорастворимых белков в грибной культуре на 34% больше, чем в контроле. На II исследуемое соединение плазмохимическая обработка оказывает противоположный эффект, наблюдалось низкое количество водорастворимых белков выделенных из тест-объекта 12 мкг/мл. Оптимальное время обработки для всех образцов 600с (Р < 0,001) (рис. 2.8, приложение 6).
Анализ полученных результатов показал, что мы имеем разный характер влияния обработанных плазмой веществ и не обработанных. Без обработки соединения в действующей концентрации 200 мкг/мл снижают количество водорастворимых белков в грибных колониях минимум на 50%. С применением обработки (оптимальное время обработки 600с) наблюдается противоположный эффект для всех соединений кроме II. Наблюдается экстремальное повышение количества водорастворимых белков максимум на 70% (адамантан) по сравнению с контролем. Таким образом, мы можем предположить разные механизмы антифунгального действия обработанных и не обработанных соединений, так как водорастворимые белки в основном ферменты, можно говорить о экстремальном росте или снижении общего фона ферментативной активности, что свидетельствует о активации или ингибировании метаболических процессов в ответ на повреждающее действие данных соединений.
Далее проводилось изучение общей дегидрогеназной активности ферментативного препарата выделенного из тест-объекта выращенного на агаризированной среде с исследуемыми соединениями. Общая дегидрогеназная активность является показателем течения окислительно-восстановительных реакций в клетке и может служить хорошим критерием для оценки антифунгального воздействие адамантана и его нитропроизводных, нанесенных на диск, или мобилизованных в диск (Р < 0,001) (рис. 2.9 и 2.10, приложение 7 и 8).
Рис. 2.9. Дегидрогеназная активность ферментативного препарата (у.е) грибных колоний As. niger при культивировании с исследуемыми веществами в концентрации 100,150 и 200 мкг/мл
Общая дегидрогеназная активность тест-объекта выращенного на среде с добавлением I и II соединения была на 19 и 30% меньше, чем в контроле. Противоположный эффект наблюдался при культивировании грибной культуры с III нитропроизводным и адамантаном: регистрировался рост ДГ на 19 и 39% (действующая концентрация 100 мкг/мл). С повышением действующей концентрации до 150 мкг/мл наблюдалось одинаковое с контролем значение изучаемого показателя в случае адамантана и I вещества. II и III нитропроизводные снижают ДГ активность грибной культуры по сравнению с контролем на 11%. С увеличением концентрации действующих веществ до 200 мкг/мл сохраняются намеченные тенденции. Можно говорить о том, что самой оптимальной концентрацией является 100 мкг/мл (Р < 0,05) (рис. 2.9, приложение 7).
Рис. 2.10. Дегидрогеназная активность ферментативного препарата (у.е) грибных колоний As. niger при культивировании с исследуемыми веществами обработанными PCVD время обработки 100, 300 и 600 с
После использования обработки плазмой мы наблюдали экстремально высокий рост ДГ активности максимум в 8 раз, по сравнению с контролем в случае адамантана и I исследуемого соединения, III нитропроизводное увеличивает данный показатель в 4 раза (время обработки 600 с). Для II исследуемого соединения оптимальным временем обработки являются 300 с, увеличение ДГ в 6,5 раз, по сравнению с контролем (Р < 0,001) (рис. 2.10, приложение 8). Можно говорить о том, что обработка плазмой увеличивает показатель общей дегидрогеназной активности тест-культуры до экстремально высокого уровня, что свидетельствует об увеличении интенсивности энергетического катаболизма, так как процессы обновления денатурированных белков (структурные белки и различные системы ферментов) требуют энергетических затрат, а значит увеличение окислительно-восстановительных процессов.
При изучении каталазной активности ферментативного препарата As.niger были получены следующие результаты.
Рис. 2.11. Каталазная активность (А) мкат/мг белка в мл ферментативного препарата грибных колоний As. niger при культивировании с исследуемыми веществами в концентрации 100,150 и 200 мкг/мл
При изучении каталазной активности тест-объекта выращенного с исследуемыми веществами наблюдался четкий дозозависимый эффект, оптимальная действующая концентрация 200 мкг/мл. Все исследуемые соединения обладают свойством повышать каталазную активность грибной культуры: I исследуемое соединение в 23,5 раза, II вещество в 34 раза, III нитропроизводное в 60 раз и адамантан в 30 раз по сравнению с контролем (Р < 0,001) (рис. 2.11, приложение 9).
Рис. 2.12. Каталазная активность (А) мкат/мг белка в мл ферментативного препарата грибных колоний As. niger при культивировании с исследуемыми веществами обработанными PCVD время обработки 100, 300 и 600 с
Применение обработки не увеличивает полученные ранее эффекты, то есть без обработки каталазная активность тест-культуры выше. Но можно сказать о том, что и с применением обработки наблюдается очень высокий уровень каталазной активности грибной культуры выращенной с I исследуемым соединением в 8,5 раза, для грибной культуры выросшей с II веществом в 44 раза, для грибной культуры выросшей с III нитропроизводным в 58 раз и для грибной культуры выросшей с адамантаном в 10 раз по сравнению с контролем (Р < 0,001) (рис. 2.12, приложение 10). Полученные данные согласуются с исследованиями других авторов [22].
Каталаза разлагает перекись водорода с выделением молекулярного, неактивного кислорода. Фермент каталаза относится к системе защиты клетки от повреждающего воздействия активных радикалов, в данном случае от перекиси водорода, которая может учувствовать в перекисном окислении липидов и разрушать мембраны.
Изучение амилолитической активности грибной культуры As. пiger, выращенной на агаризированной среде с тест-дисками необработанными и обработанными плазмохимически, не выявили достоверное отличие опыта, по сравнению с контролем (приложение 11 и 12).
Можно сделать вывод о том, что исследуемые нитропроизводные адамантана обладают антифунгальным действием, больше всего этот эффект выражен у N-адамантоила-м-нитро-п-толуидина, меньше всего у 3-нитро-1-адамантанкарбоновой кислоты, по сравнению с контрольной группой. Все нитропроизводные адамантана способствуют снижению и даже прекращению действия эндопептидаз, значит, останавливается белковый обмен в клетке, не происходит утилизация старых белков, это же мы наблюдаем внешне на грибных колониях меняется их характер роста: уменьшается площадь роста грибной культуры в чашке Петри, меняется характер пространственного распределения грибных колоний, уменьшение фрактальной размерности свидетельствует об упорядоченности роста, когда рост перестает осуществляться равномерно по всем направлениям, наблюдается избегание определенных зон. Препятствием в данном случае может служить воздействие адамантана и его нитропроизводных, нанесенных на диск, или мобилизованных в диск, наблюдается пигментация. Без обработки соединения снижают количество водорастворимых белков в грибных колониях минимум на 50%. С применением обработки наблюдается противоположный эффект для всех соединений кроме II. Наблюдается экстремальное повышение количества водорастворимых белков максимум на 70% (адамантан) по сравнению с контролем. Таким образом, мы можем предположить разные механизмы антифунгального действия обработанных и не обработанных соединений, так как водорастворимые белки в основном ферменты, можно говорить об экстремальном росте или снижении общего фона ферментативной активности, что свидетельствует об активации или ингибировании метаболических процессов в ответ на повреждающее действие данных соединений. Можно говорить о том, что обработка плазмой увеличивает показатель общей дегидрогеназной активности тест-культуры до экстремально высокого уровня, что свидетельствует об увеличении интенсивности энергетического катаболизма, так как процессы обновления денатурированных белков (структурные белки и различные системы ферментов) требуют энергетических затрат, а значит увеличение окислительно-восстановительных процессов. Все исследуемые соединения повышали уровень каталазной активности грибной культуры до экстремально высоких значений, что говорит о большом количестве перекиси водорода в клетке, а значит о высоком уровне стресса.
Также было доказано, что обработка в плазме тлеющего разряда увеличивает данные эффекты для адамантана, 3-нитро-1-адамантанкарбоновой кислоты и N-адамантоила-м-нитро-п-толуидина. Можно рекомендовать PCVD обработку различных материалов (перевязочный материал, катетеры, керамическая плитка, полимерные трубки) [14] для придания им антифунгальных свойств. Такие материалы с антифунгальными свойствами могут применяться в медицине, строительстве, машиностроении. Мы не рекомендуем применение PCVD обработки для N-адамантоила-о,о-дихлор-п-нитроанилина, такой способ иммобилизации видимо разрушает это соединение и уменьшает его антигрибковый эффект.
ВЫВОДЫ
1. PCVD обработка уменьшает площадь роста грибных колоний при взаимодействии с тест-дисками в случае адамантана, 3-нитро-1-адамантанкарбоновой кислоты и N-адамантоила-м-нитро-п-толуидина, оптимальное время обработки 300 с. В случае N-адамантоила-о,о-дихлор-п-нитроанилина лучший антифунгальный эффект наблюдался без применения обработки.
2. PCVD обработка уменьшает фрактальную размерность грибных колоний при взаимодействии с тест-дисками адамантана и 3-нитро-1-адамантанкарбоновой кислоты, повышает в случае N-адамантоила-м-нитро-п-толуидина и N-адамантоила-о,о-дихлор-п-нитроанилина (время обработки 100, 300, 600 с). Время обработки не влияет на изменение данного критерия оценки роста.
3. PCVD обработка полностью ингибирует эндопротеолитическую активность ферментов грибных колоний при взаимодействии с тест-дисками адамантана, 3-нитро-1-адамантанкарбоновой кислоты и N-адамантоила-м-нитро-п-толуидина, в случае N-адамантоила-о,о-дихлор-п-нитроанилина протеолитическая активность грибной культуры остается неизменной.
4. PCVD обработка увеличивает количество водорастворимых белков в грибной культуре выращенной с адамантаном и 3-нитро-1-адамантанкарбоновой кислотой, по сравнению с контролем на 70 и 54%. В случае N-адамантоила-м-нитро-п-толуидина увеличение составило 34%. На N-адамантоил-о,о-дихлор-п-нитроанилин плазмохимическая обработка оказывает противоположный эффект, наблюдалось снижение этого показателя на 76%. Оптимальное время обработки для всех образцов 600 с.
5. PCVD обработка повышает общую дегидрогеназную активность грибной культуры максимум в 8 раз, по сравнению с контролем в случае адамантана и 3-нитро-1-адамантанкарбоновой кислоты, N-адамантоил-м-нитро-п-толуидин увеличивает данный показатель в 4 раза (время обработки 600 с). Для N-адамантоила-о,о-дихлор-п-нитроанилина оптимальным временем обработки являются 300 с, увеличение ДГ в 6,5 раз по сравнению с контролем
6. PCVD обработка увеличивает каталазную активность тест-объекта для 3-нитро-1-адамантанкарбоновой кислоты в 8,5 раза, N-адамантаила-о,о-дихлор-п-нитроанилина в 44 раза, N-адамантоил-м-нитро-п-толуидина в 58 раз и адамантана в 10 раз по сравнению с контролем
7. PCVD обработка не влияет на амилолитическую активность грибных колоний, нет достоверных различий между опытом и контролем.
8. PCVD обработка увеличивает антифунгальное действие адамантана, 3-нитро-1-адамантанкарбоновой кислоты и N-адамантоил-м-нитро-п-толуидина и уменьшает у N-адамантаила-о,о-дихлор-п-нитроанилина.
СПИСОК ИСТОЧНИКОВ ЛИТЕРАТУРЫ
1. Адгезия полимеров к металлам / В. А. Белый, Н. И. Егоренков, Ю. М. Плескачевский. − Минск : Наука и техника, 1971. − 286 с.
2. Аравийский Р.А., Белянин В.Л. Инфекции, вызванные слабопатогенными грибами // Проблемы медицинской микологии, 2001. Т.2. №2. С. 40-41.
3. Белоусова Т.А., Базовая Д.А., Горячкина М.В. Нераспознанный случай в общеклинической практике // Успехи медицинской микологии – М.: Национальная академия микологии, 2006. Том 8. Глава 8. С.156-157.
4. Беккер З.Э. Физиология и биохимия грибов. − М.: Издательство МГУ, 1988 . − 229 с.
5. Билай В.И. Основы общей микологии. – Киев: Вища школа, 1980. – 315 с.
6. Борисов А.Б. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. – М.: Медицина, 1979. – 44 с.
7. Божокин С.В., Паршин В.А. Фракталы и мультифракталы. – Ижевск: НИЦ «Регулярная и хаотическая динамика», 2001. – 128 с.
8. Быков М.Ф., Волгин Ю.Ф., Гутников Ю.Э. Зависимости состава плёнок Si3N4 , полученных плазмохимическими методами от скорости роста // Электрон. техника, 1979. Сер. 7. вып.2. С.11-14.
9. Василец В.Н., Тихомиров Л.А., Пономарёв А.Н. Исследование действия плазмы высокочастотного разряда на поверхность полиэтилена // Химия высоких энергий, 1978. Т.12. №5. С. 442-447.
10. Врынчану Н.А. Антифунгальная активность мази на основе нового аминопроизводного адамантана // Успехи медицинской микологии – М.: Национальная академия микологии, 2005. Том V. Глава 8. С.297-298.
11. Врынчану Н.А. Ингибирующая активность 4-(адамантил-1)-1-(1-аминобутил) бензола по отношению к дрожжеподобным грибам // Успехи медицинской микологии – М.: Национальная академия микологии, 2007. Том IX. Глава 7. С. 281-282.
12. Высокочастотная плазменно-струйная обработка материалов при пониженных давлениях. Теория и практика применения / И.Ш.Абдуллин, В.С.Желтухин, Н.Ф.Кашапов. Изд-во Казанского Университета, 2000.− 347 с.
13. Гапонов-Грехов А.В., Рабинович И.М. Проблемы нелинейной динамики // Вестник Российской академии наук, 1997. 67: С. 608-614.
14. Давиденко Т.І., Бондаренко Г.І., Алексеева Л.А. Иммобилизация протеолитических ферментов совместно с бронополом на угольной ткани-АУВМ // Труды Одесского политехнического университета, 2003. вып. 1(19) С. 241-245.
15. Державин Д.К., Исаев В.В. Фрактальная самоорганизация агрегирующих in vitro гемоцитов моллюска Mizuhopecten yessoensis // Доклады Российской академии наук, 2000. 373. С.254-256.
16. Дудикова Д.М., Романова Е.А., Врынчану Н.А. Изучение влияния Mg2+ на антифунгальноедействие производного адамантана // 11 Съезд микологов России. Тезисы докладов. Моссква-Пущино, 2009. Раздел 11. С.290-291.
17. Дудикова Д.М., Врынчану Н.А., Короткий Ю.В. Механизм антифунгального действия производного адамантана ЮК­23 // Успехи медицинской микологии – М.: Национальная академия микологии, 2010. Том 12. Глава 2. С. 83-84.
18. Егорова Л.Н. Почвенные грибы Дальнего востока. – Л.: Наука, 1986. – 191с.
19. Закиров М. З. Ферменты плесневых грибов. − Ташкент: Фан, 1975. − 123 с.
20. Звягинцева Д.Г., Бабьева И.Л., Зенова Г.М., Биология почв. – М.: Московский университет, 2005. С. 81.
21. Ильюк А. Г. Чувствительность изолятов Fusarium spp. К некоторым фунгицидам // 11 Съезд микологов России. Тезисы докладов. − Москва-Пущино, 2009. Раздел 11. С. 292-293.
22. Ичеткина А.А, Кряжев Д.В., Смирнов В.Ф Особенности адаптации микромицета Aspergillus niger к воздействию ультрафиолетового излучиния и ультразвука // Проблемы и перспективы современной науки. – Томск, 2011. Т.3. №1. С. 84-86.
23. Кириленко Т.С. Атлас родов почвенных грибов. – Киев: Наукова Думка, 1979. С.9.
24. Кленова Н.А. Большой спецпрактикум по биохимии. – Самара: Самарский государственный университет, 1996. – 69 c.
25. Ковтуненко В.О. Лікарські засоби з дією на центральну нервову систему. – Київ: Ірпінь: ВТФ «Перун», 1997. – 464 с.
26. Козлова Я.И., Борзова Ю.В., Климко Н.Н., Описание двух случаев инвазионного апергиллёза легких, вызванного Aspergillus niger, контаминирующим жилые и производственные помещения // Проблемы мед. микологии. 2006. Т.8. №1. С. 16-20.
27. Красовский А.М. Толстопятов Е.М. Получение тонких полимерных плёнок распылением полимеров в вакууме // Минск. Наука и техника, 1989. С. 122-124.
28. Кудина М.И. Отомикоз: проблема глазами дерматолога // Иммунология, иммунопатология, аллергология, 2004. №4. С. 75-78.
29. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. – М.: Медицина, 1978. – 53 с.
30. Литвинов В.П. Биологическая активность производных адамантана // Химия гетероциклических соединений, 2002. №1. С. 12-39.
31. Ландау Н.С. Егоров Н.С. Особенности накопления в среде и некоторые свойства протеолитических ферментов, образуемых Nocardia minima // Микробиология, 1996. Т.65. №1. С. 42-47.
32. Мандельброт Б. Фрактальная геометрия природы. – Москва: Институт компьютерных исследований, 2002. – 656 с.
33. Марфенина. О.Е. Антропогенная экология почвенных грибов. − М., 2005. − 196 с.
34. Маянский А.Н., Заславская М.И., Салина Е.В. Введение в медицинскую микологию: Учеб.- методическое пособие. – Н. Новгород, 2000. – 54 с.
35. Метель А. С., Григорьев С. Н. Тлеющий разряд с электростатическим удержанием электронов: физика, техника, применения. − М.: ИЦ МГТУ «Станкин», 2005. − 300 С.