Спектрофотометрия в ультрафиолетовой области в фармацевтическом анализе.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Стр.
ПЛАН РАБОТЫ 3
ВВЕДЕНИЕ 4
1. Обзор литературы 6
1.1. Сферы использования метода УФ-спектрофотометрии 6
1.2. Виды УФ-спектрофотометров 8
2. Теоретические основы и описание метода 9
3. Методики определения различных веществ методом УФ-спектрофотометрии13
3.1. Количественное определение кортизона ацетата в таблетках 13
3.2. Количественное определение прегнина 14
3.3. Количественное определение пироксикама в таблетках по 0,01 г 14
3.4. Идентификация тиамина гидробромида 15
3.5. Идентификация пиридоксина гидрохлорида 16
3.6. Определение примесей апоатропина в атропина сульфате 16
Заключение 19
Литература 20

Спектрофотометрия в ультрафиолетовой области в фармацевтическом анализе.

Существуют и применяются два принципиально различных способа спектрофотометрических количественных определений. (по ГФУ). По одному из них содержание вещества в процентах (х) рассчитывают на основании предварительно вычисленной величины поглощения, чаще по величине:
Где b – разведение;
a – навеска, г.
Примером такого определения является определение содержания кортизона ацетата в таблетках по ГФУ.
Основным недостатком этого метода является общеизвестный факт, что различные спектрофотометры (в том числе и приборы одной и той же модели и одного производства) дают значительные отклонения по величине поглощения для одного и того же стандартного раствора.
Этим методом можно определить такие вещества как: меркаптопурин, папаверина гидрохлорид, дубильные вещества (танин), флавоноиды (рутин).
Более достоверные и воспроизводимые результаты обеспечивает сравнение поглощения испытуемого вещества с поглощением стандартного образца, определяемого в тех же условиях. При этом учитываются многочисленные факторы, влияющие на спектрофотометричесие измерения, например установка длинны волны, ширина щели. Поглощение кюветы поправки на поглощение растворителя и т.п.
Согласно ГФУ, спектрофотометрическое количественное определение содержания лекарственного вещества при анализе индивидуальных веществ должно быть связано с применением специального приготовленного стандартного образца этого вещества. Примерами являются стероидные вещества, включенные в ГФУ. При количественном анализе лекарственных форм, если нет специальных указаний, допускают использовать в качестве стандартного образца вещество, отвечающее всем требования фармакопеи. При расчетах такой стандартный образец принимают за 100%, если нет других указаний. Помимо этого существует метод внешнего стандарта – это метод, в котором в качестве стандарта используют не то вещество, которое исследуют, а другое. Например, для анализа каротиноидов в качестве стандарта используют калия бихромат.
Расчет количественного содержания индивидуального вещества в процентах (х) при использовании стандартного образца проводится по формуле:
где – оптическая плотность исследуемого раствора;
– оптическая плотность раствора стандартного образца;
– концентрация раствора стандартного образца;
b – разведение;
а – навеска, г.
Содержание вещества в одной таблетке в граммах (х), считая на среднюю массу таблетки, рассчитывают по формулам:
где q – средняя масса таблетки, г.
Если количественные измерения выполняются достаточно часто. Можно вместо стандартного образца использовать подходящий калибровочный график, полученный для соответствующего стандартного образца. Таким графиком можно пользоваться, когда для испытуемого вещества поглощение пропорционально концентрации, используемой в количественном определении. Такие калибровочные графики не надо часто проверять и каждый раз готовить заново для нового прибора и новой серии реактивов.
Калибровочный график – это экспериментально определенная графическая зависимость оптической плотности от концентрации. Такой график используют в том случае если для испытуемого вещества поглощение пропорционально концентрации в пределах 75–125% от конечной концентрации которая применяется в количественном определении. [9]
Этим методом можно определить такие вещества как: кортизона ацетат, прегнин, проксикам.
3. Методики определения различных веществ методом УФ-спектрофотометрии
3.1. Количественное определение кортизона ацетата в таблетках
Около 0,1 г точная навеска порошка растертых таблеток помещают в мерную колбу на 100 мл с притертой пробкой добавляют 60–70 мл 95% спирта и слегка нагревают на водяной бане при перемешивании в течение 10 – 15 мин. После охлаждения доводят объем раствора 95% спиртом до метки, тщательно перемешивают и отстаивают в течение 1 часа. Не взбалтывая осадок, 5 мл раствора переносят в другую мерную колбу на 100 мл и доводят объем раствора тем же спиртом до метки. Измеряют оптическую плотность на спектрофотометре при длине волны 238нм в кювете толщиной шара 1 см.
Содержание кортизона ацетата в г, рассчитывают по формуле
Где:
A – оптическая плотность испытуемого раствора
mср – средняя маса таблетки
m – масса навески порошка растертых таблеток
390 – показатель преломления кортизона ацетата при длине волны излучения 238 нм.
Содержание кортизона ацетата должно быть 0,022-0,028 г в перерасчете на среднюю массу одной таблетки.
3.2. Количественное определение прегнина
Определяют оптическую плотность 0,001% раствора субстанции в 95% спирте на спектрофотометре при длине волны 241нм в кювете толщиной шара 1 см. Повторяют такие же измерения для 0,001% раствора стандартного образца прегнина.
Содержание прегнина расчитывают по формуле:
Где:
– оптическая плотность исследуемого раствора;
– оптическая плотность раствора стандартного образца;
– концентрация раствора стандартного образца;
С – концентрация испытуемого раствора.
Содержание пригнина в субстанции должно быть не менее 97 и не более 103%.
3.3. Количественное определение пироксикама в таблетках по 0,01 г
Рис. 2. УФ спектр поглощения пироксикама
При 334 нм находится аналитическая линия поглощения, которая используется для количественного определения пироксикама.
Колбу на 100 мл, добавляют 10 мл теплого 95% спирта, встряхивают в течение 15 минут, охлаждают, доводят объем раствором соляной кислоты 0,1 моль/л до метки, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр марки «синяя лента» выбрасывая первые 10мл фильтрата; 3 мл фильтрата переносят в мерную колбу на 50 мл, доводят объем раствором соляной кислоты 0,1 моль/л до метки и перемешивают. Измеряют и оптическую плотность полученного раствора на спектрофотометре при длине волны 334нм в кювете толщиной шара 10мм, в качестве раствора сравнения используем соляную кислоту 0,1 моль/л. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора РСО пироксикама.
Содержание пироксикама в г, рассчитывают по формуле:
Где:
– оптическая плотность исследуемого раствора;
– оптическая плотность раствора стандартного образца пироксикама
mср – средняя маса таблетки гр.
m – масса навески порошка растертых таблеток
- масса навески РСО пироксикама в гр.
Содержание пироксикама должно біть 0,009 – 0,011 г в перерасчете на среднюю массу одной таблетки.
3.4. Идентификация тиамина гидробромида
Около 20 мг субстанции растворяют в 10 мл воды Р добавляют 1 мл кислоты уксусной Р и 1,6 мл 1 М раствора натрия гидроксида, нагревают на водяной бане в течение 30 мин. затем охлаждают. К полученному раствору прибавляют 5 мл раствора натрия гидроксида разведенного Р 10 мл раствора калия ферецианида Р, 10 мл бутанола Р и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. В верхнем спиртовом шаре наблюдается голубая флуоресценция особенно в УФ свете при длине волны 365 нм (метод показателя поглощения).
3.5. Идентификация пиридоксина гидрохлорида
1,0 мл раствора S доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до объема 50,0 мл (это раствор А). 1,0 мл раствора А доводят 0,1 М раствором кислоты хлористоводородной до объема 100,0 мл. Ультрафиолетовый спектр поглощения полученного раствора в области 250 – 350 нм должен иметь максимум на длине волны от 288 до 296нм. Удельный показатель поглощения в максимуме должен быть от 425 до 445нм
Где:
 - это молярный показатель поглощения
b – длина оптического пути, см
с – концентрация веществ в растворе в молях на л
Величина представляет собой удельный показатель поглощения
3.6. Определение примесей апоатропина в атропина сульфате
Допустимое количество примесей не более 0,5%. 0,10 г субстанции растворяют в 0,01 М растворе кислоты хлористоводородной и доводят объем раствора тем же растворителем до 100,00мл. Измеряют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 245 нм. Удельный показатель преломления должен быть не более 4,0 в пересчете на безводное вещество [3,9].
Где:
- это молярный показатель поглощения
b – длина оптического пути, см
с – концентрация веществ в растворе в молях на л
Величина представляет собой удельный показатель поглощения
Современные физико-химические методы позволили в ряде случаев заменить сложные, дорогостоящие, требующие наличия подопытных животных методики биологической оценки качества лекарственных веществ. В частности, сопоставимые результаты были достигнуты при анализе антибиотиков тетрациклинового ряда методом прямой и дифференциальной спектрофотометрии [2, 26] и аминогликозидных антибиотиков экстракционно-фотометрическим методом с использованием в качестве реактива Калькона (кислотный краситель) в присутствии других антибиотиков в биологических жидкостях [15, 18].
В последние годы опубликовано несколько обзоров по использованию различных фотометрических методов для контроля качества и стандартизации лекарственных веществ [14, 17]. Наряду с другими физико-химическими методами для анализа водорастворимых витаминов группы В рекомендованы методы прямой и дифференциальной спектрофотометрии [5], для анализа жирорастворимых витаминов А, Е, D [6] и производных барбитуровой кислоты [30] методы спектрофотометрии в УФ и видимой областях, а также производная спектрофотометрия [16]. Лекарственные препараты, содержащие гестагенные гормоны, определяют методом спектрофотометрии в УФ и видимой областях [17].
Заключение
В процессе достижения цели курсовой работы и решения поставленных задач были получены следующие результаты: было дано краткое описание метода, обозначены сферы использования данного метода, а так же описаны виды современных УФ–спектрофотометров. В результате изучения литературных источников по данной теме можно утверждать, что спектрофотометрия является перспективным методом анализа.
Литература