Фармацевтический анализ эстрогенов

ЭСТРОГЕНЫ
СИНЭСТРОЛ
Качественные реакции
Количественное определение
ЭСТРОН
Качественные реакции
Количественное определение
Приборы, аппаратура и посуда
Реактивы, растворы и материалы
Отбор пробы воздуха
Подготовка к измерению
Проведение измерения
Расчет концентрации
Диэтилстильбэстрол
Качественные реакции
Количественное определение
Определение синестрола в мази (вазелин 30,0, ланолин 30,0, синестрол 2% -1 мл)
Список литературы

Фармацевтический анализ эстрогенов

прибавляют 0,5 мл хлористого бензоила.
Количественное определение
(4)
Количественно определяется биологическим путем.
Определение эстрона основано на использовании газовой
хроматографии на приборе с электронно-захватным детектором с
предварительным превращением эстрона в трифторацетат эстрона(5).
Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.
Нижний предел измерения содержания эстрона в
хроматографируемом объеме раствора - 0,0025 мкг.
Нижний предел измерения концентрации эстрона в воздухе - 0,001
мг/куб. м (при отборе 2400 л воздуха).
Диапазон измеряемых концентраций в воздухе от 0,001 до 0,1
мг/куб. м.
Определению эстрона не мешают тестостерон и этинилэстрадиол.
Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 20%.
Время выполнения измерения, включая отбор проб, - 1 час.
Приборы, аппаратура и посуда
Газовый хроматограф "Агат" с электронно-захватным детектором.
Колонка хроматографическая стеклянная длиной 1,5 м и
внутренним диаметром 2 мм.
Микрошприц вместимостью 10 мкл МШ-10, ГОСТ 8043-74.
Пробирки колориметрические, ГОСТ 25336-82Е.
Колбы мерные вместимостью 25 и 100 мл, ГОСТ 1770-74Е.
Пипетки вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 29227-91.
Ротационный испаритель ИР-1М с набором колб, ТУ 25-11-917-76.
Аппарат для встряхивания пробирок АВ-30С, ТУ 64-1-2451-785.
Аспирационное устройство ЭА-2С-М1, ТУ 2.840.016.
Посуда лабораторная мерная, ГОСТ 1770-74Е.
Реактивы, растворы и материалы
Эстрон, содержание основного вещества не менее 99%.
Тетрагидрофуран, хч, ТУ 6-09-3686-77 (свежеперегнанный).
Трифторуксусный ангидрид, хч, ТУ 6-09-4135-75, 10%-ный раствор
в тетрагидрофуране (раствор хранят не более 7 дней).
Пиридин, хч, ГОСТ 13647-78.
Фильтр АФА-ВП-20, ТУ 95-743-80.
Азот газообразный в баллонах, осч, ГОСТ 9293-74.
Хроматон N-AW с 5% SE-30 - сорбент для хроматографической
колонки с дисперсностью 0,16 - 0,20 мм.
Основной стандартный раствор эстрона с концентрацией 0,1 мг/мл
готовят растворением 10 мг эстрона в мерной колбе вместимостью 100
мл в тетрагидрофуране.
Градуировочные растворы эстрона с концентрацией от 0,5 мкг/мл
до 50 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением основного
стандартного раствора тетрагидрофураном.
Срок хранения растворов в холодильнике - 2 недели.
Отбор пробы воздуха
Воздух объемным расходом 200 л/мин. аспирируют через фильтр,
закрепленный в фильтродержателе, снабженном металлической сеткой.
Для определения эстрона на уровне 0,001 мг/куб. м следует отобрать
2400 л воздуха. Экспонированный фильтр складывают в 4 раза и
помещают в бюкс с притертой крышкой. Фильтр хранят в холодильнике
не более недели.
Подготовка к измерению
Хроматографическую колонку заполняют сорбентом и
кондиционируют в токе газа-носителя (скорость газа-носителя - 50
мл/мин.) при отключенном детекторе, постепенно повышая температуру
от 50 до 280 -C со скоростью 2 град./мин., и выдерживают при 280
-C в течение 24 часов. После этого колонку присоединяют к
детектору, снижают температуру до рабочей.
В пробирки с притертыми пробками отбирают по 7 мл
градуировочных растворов, добавляют 1 мл 10%-ного раствора
трифторуксусного ангидрида в тетрагидрофуране и 2 - 3 капли
пиридина. В результате реакции ацилирования образуется
трифторацетат эстрона с выходом 100%.
Смесь выдерживают при комнатной температуре в течение 5 минут,
затем переносят в грушевидную колбу вместимостью 10 - 15 куб. см и
отгоняют растворитель на роторном испарителе при комнатной
температуре.
Сухой остаток растворяют в 0,5 мл свежеперегнанного
тетрагидрофурана и вводят по 5 мкл каждого градуировочного
раствора в испаритель хроматографа через самоуплотняющуюся
мембрану.
На основании полученных данных строят градуировочную кривую,
выражающую зависимость высоты пика (мм) от содержания вещества в
градуировочном растворе (мкг).
Построение градуировочного графика необходимо проводить по 6
точкам, проводя 5 параллельных определений для каждой
концентрации.
Условия хроматографирования градуировочных смесей и
анализируемых проб:
Температура колонки - 250 -C.
Температура испарителя - 300 -C.
Скорость потока газа-носителя (азота) - 50 мл/мин.
-12
Шкала чувствительности прибора - 4 х 10 А.
Скорость движения диаграммной ленты - 6 мм/мин.
Время удерживания производного эстрона - трифторацетата
эстрона - 4 мин. 40 сек.
Объем вводимой пробы - 5 мкл.
Проведение измерения
Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку, заливают 3 мл
свежеперегнанного тетрагидрофурана и встряхивают в течение 5
минут. Раствор сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой, затем
операцию повторяют еще 2 раза, используя для экстракции по 2 мл
тетрагидрофурана. Степень адсорбции с фильтра - 98%. Экстракты
объединяют. Далее анализ проводят аналогично градуировочным
растворам. Количественное определение вещества в мкг в
анализируемой пробе проводят по предварительно построенному
градуировочному графику.
Расчет концентрации
Концентрацию эстрона "C" в воздухе (в мг/куб. м) рассчитывают
по формуле:
a х B
C = -----,
б х V