Доклинические исследования

Протоколы на серию продукции и упаковку серии продукции.
Для каждой серии или части серии продукции должны составляться протокол на серию продукции и протоколы на упаковку, которые хранятся в установленном порядке.
Протокол на серию должен быть составлен в соответствии с промышленным регламентом и технологическими инструкциями. В протоколе должен быть указан номер произведенной серии продукции.
Протоколы на упаковку серии продукции должны быть основаны на действующих инструкциях по упаковке. В протоколах указываются номер серии и количество нерасфасованной продукции, подлежащей упаковке, а также номер серии и планируемое количество готовой продукции.
Перед началом любого технологического процесса или любой упаковочной операции необходимо проверить и оформить протокол о том, что оборудовани ...

Содержание 2
Введение 3
1. Доклинические испытания 5
2. Стандартные операционные процедуры (СОПы) 8
3. Материалы доклинического исследования 15
4. Протокол доклинического исследования 18
6. Доклинические исследования тромболитического препарата фортелизин 25
7. Ошибки доклинических исследований 29
Вывод: 30
Заключение 31
Список литературы 33

Внедрение современных препаратов в клиническую практику осуществимо лишь при условии детального изучения их специфической фармакологической активности и безопасности на этапе экспериментальных (доклинических) исследований. В России эти исследования проводятся в соответствии с ГОСТ Р-53434-2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики» (Рrinciples of Good Laboratory Practice) и Приказом Минздравсоцразвития РФ №708н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики», предполагающими тщательное изучение нового препарата на различных животных с их современным качественным обследованием с целью исключения неблагоприятных последствий при применении препарата у людей. качество хранение
Лекарственные средства относятся к категории продукции, источники опасности которой могут возника ть в равной степени, как на стадии разработки, так и на стадии производства.
В фармацевтической сфере на национальном и международном уровнях эволюционно сформировалась система управления качеством, без которой невозможно современное развитие отрасли, учитывая высокую степень риска лекарственных средств для здоровья и жизни человека. Фактор качества в основном закладывается в лекарство в процессе разработки, подтверждается в ходе клинических испытаний, государственной экспертизы и регистрации, обеспечивается в процессе серийного производства, поддерживается на всех стадиях распределения и контролируется путем выборочных испытаний образцов готовой продукции, инспектирования условий производства и осуществления надзора за применением и побочными реакциями.
Стандартные операционные процедуры – документы, в которых детально изложено выполнение определенных лабораторных процедур, которые, как правило, не детализированы в протоколах исследований и методических руководствах.
Доклиническое исследование – это изучение фармакологических, токсических и фармацевтических (включая физико-химические) свойств веществ и\или их комбинаций и разработка и исследование новых лекарственных форм [2].
Целью ДИ лекарственных средств является получение научными методами оценок и доказательств безопасности и эффективности лекарственных средств [2].
Доклинические исследования безопасности ЛП направлены на выявление возможного повреждающего действия ЛС. Такие исследования условно делятся на изучение общетоксического действия (общая токсичность) и исследование специфических видов токсичности.
При исследовании общей токсичности происходит выявление переносимых и токсических доз фармакологического вещества [2], а также основных органов и систем организма, подверженных повреждающему действию изучаемого вещества. Доклинические исследования общетоксического действия включают: исследование острой токсичности (при однократном или дробном введении через короткие (не более 3-6 часов) интервалы в течение суток), субхронической (подострой) токсичности (продолжительность введения 2-12 недель), хронической токсичности (включает в себя повторные введения препарата на протяжении 1 года, а иногда и более) [2].
Исследование специфической токсичности направлено на выявление репродуктивной токсичности (эмбриотоксичности, тератогенности, влияния на генеративную функцию), аллергенности, иммунотоксичности, мутагенности и канцерогенности фармакологического средства.
Доклинические исследования эффективности – это изучение фармакокинетических свойств препарата, а также специфической фармакологической активности лекарственного препарата, проводимое на моделях заболеваний/синдромов у лабораторных животных. Данный вид исследований позволяет изучить его фармакодинамические свойства, определяющие в последующем объем и дизайн клинических исследований, а также показания к применению лекарственного препарата.
Результаты доклинического исследования подаются вместе с протоколом клинических исследований и проектом инструкции по медицинскому применению для решения вопроса о возможности проведения клинических исследований.

• особые указания (например, особенности назначения дорогостоящих услуг или получения дорогостоящих лекарств);
• достигаемые результаты и ориентировочное время их достижения;
• время нахождения в конкретных подразделениях медицинской организации и преемственность на этапах оказания медицинской помощи;
• контроль качества выполнения медицинской помощи конкретному пациенту с учетом удовлетворения его потребностей в медицинской помощи и т. д.
СОПы по выполнению требований к лекарственному лечению должны включать:
• время назначения лекарственных средств (от момента обращения в амбулаторно-поликлиническое учреждение или поступления в стационар);
• при необходимости - указание на специалиста, назначающего лекарственное средство, или иные особые указания (указание на те лекарственные средства, которые назначаются только после консультации с клиническим фармакологом, клинико-экспертной комиссией, узкими специалистами, особенности назначения дорогостоящих препаратов, и др.).
Кроме того, в клиническом протоколе должны быть представлены СОПы, обеспечивающие преемственность и этапность оказания медицинской помощи, в частности:
• показания для направления на консультацию к специалистам, в специализированные учреждения; на госпитализацию; на санаторно-курортное лечение (если таковые предусмотрены клиническим протоколом);
• перечень медицинских организаций, в которых больные могут получать помощь за пределами настоящей организации, и процедуры направления пациентов в соответствующие организации;
• частота обходов заведующими отделениями или сотрудниками кафедр и др.
Здесь могут также быть указаны внешние консультации, порядок перевода в отделение, кто в какое время, на каком основании принимает решение.
Таким образом, разработка СОПов должна проводиться на всех уровнях системы здравоохранения: от расшифровки Программ и Приказов федерального значения и введения их в действие, работы федеральных и региональных экспертных органов до внедрения СОПов в работу конкретных медицинских организаций. Формирование и повсеместное использование ясных, четких, отвечающих современному развитию медицинской науки стандартных операционных процедур может стать одним из действенных элементов системы управления качеством медицинской помощи.
3. Материалы доклинического исследования
Материалы доклинического исследования лекарственных средств – комплект документов доклинического изучения лекарственного средства, включающий отчеты по химическим, физическим, биологическим, микробиологическим, фармацевтическим, фармакологическим, токсикологическим и другим экспериментальным научным исследованиям или литературные данные относительно состава, показателей качества и методов контроля качества, свойств, специфической активности и безопасности лекарственного средства, включая протоколы доклинического изучения.
Стандартные операционные процедуры – документы, в которых детально изложено выполнение определенных лабораторных процедур, которые, как правило, не детализированы в протоколах исследований и методических руководствах.
Протокол доклинического исследования – документ, который описывает задачи, методологию, процедуры, методы статистической обработки данных и организацию исследования.
Первичные данные исследования – документы, отражающие наблюдения и манипуляции, проводимые во время исследования (записи в рабочих листах, лабораторных журналах, фотографии и фильмы, распечатки с автоматизированных приборов, дискеты, записи параметров окружающей среды в комнатах содержания животных, сертификаты на животных, текущая документация состояния здоровья животных, записи об эксплуатации и техническом обслуживании оборудования, расчетные процедуры).
Отчет о проведенных исследованиях– представленные в письменной форме результаты доклинического исследования лекарственного средства, включающие описание доклинических и статистических методов, данные, полученные в ходе исследования, и выводы.
Стандартные операционные процедуры
Стандартные операционные процедуры разрабатываются на все производственные операции, включая: поступление, идентификацию, маркировку, обработку, отбор проб, использование и хранение исследуемых и стандартных веществ; обслуживание и калибровку измерительных приборов и оборудования для контроля окружающей среды; приготовление реактивов, питательных сред, кормов; ведение записей, отчетов и их хранение; обслуживание помещений, в которых содержатся тест-системы, прием, транспортировку, размещение, описание, идентификацию и уход за тест-системами; обращение с тест-системами; обезвреживание или утилизация тест-системы; осуществление программы по обеспечению качества.
Соблюдение стандартных операционных процедур осуществляется в целях обеспечения качества, достоверности и воспроизводимости результатов исследования.
Отклонения от СОП должны быть документально оформлены и согласованы с руководителем исследования. Стандартные операционные процедуры подлежат своевременному пересмотру.
Отчет о проведенных исследованиях
Заявитель в течение 30 дней после окончания проведения доклинического исследования лекарственного средства представляет в ФГУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава России, Фармакологический комитет Минздрава России отчет о проведенном исследовании.
В отчете о доклиническом исследовании лекарственного средства должны быть представлены:
Название, адрес Учреждения, даты начала и завершения доклинических исследований, цель и задачи исследования.
Описание исследуемого лекарственного средства, включая сведения о физических, химических, биологических, фармацевтических свойствах, составе лекарственной формы.
Вид исследования, характеристика и обоснование тест-системы, отобранной для проведения доклинических исследований.
В случае проведения экспериментальных исследований на животных необходимо указать:
Вид, возраст, количество животных в каждой группе, пол, показатели массы тела, источник питания.
Режим дозирования, кратность и путь введения исследуемого лекарственного средства.
Схема проведения доклинического исследования лекарственного средства.
Описание методов статистической обработки результатов, результаты исследования, представленные в виде обобщающих таблиц (графиков) с соответствующей статистической обработкой, и комментариев к ним, обсуждение результатов, выводы.
Отчет о результатах проведения доклинических исследований составляется руководителем исследований, подписывается руководителем Учреждения и скрепляется печатью Учреждения.
Дополнения к отчету должны быть оформлены в виде приложений, содержащих ссылку на соответствующий раздел отчета (параграф, рисунок, таблицу и т.д.) и подписанных руководителем Учреждения.
4. Протокол доклинического исследования
Доклиническое исследование лекарственных средств должно проводиться в соответствии с протоколом, отражающим цели работы и методы, используемые для достижения этих целей. Протокол исследования должен быть одобрен Заказчиком и утвержден руководителем исследования.
Протокол включает в себя:
Цель исследования;
Задача исследования;
Сведения об исследуемом лекарственном средстве (физические, химические, биологические, фармацевтические свойства);
Сведения о препарате сравнения (физические, химические, биологические, фармацевтические свойства);
Используемые методы исследования;
Описание используемой в исследовании тест-системы;
Способы и пути введения исследуемого препарата и препарата сравнения;
Схема исследования, обоснование избранной схемы исследования;
Этические и правовые нормы доклинического исследования;
Оценка эффективности и безопасности исследуемого препарата;
Поправки к протоколу доклинического исследования;
Статистическая обработка результатов исследования;
Составление отчета;
Литература.
Вносимые изменения в протокол исследования утверждаются руководителем исследования, а отклонения от протокола (незапланированные события, непредвиденные обстоятельства, упущения) записываются, пронумеровываются, подписываются, датируются в приложении с указанием причин.
5. Доклинические исследования противоаритмических препаратов.
Аритмия - патологическая электрическая активность в сердечной мышце, которая может быть вызвана либо аномальным формированием, либо проведением электрического импульса, а также двумя этими причинами. Аритмия остается одной из основных причин заболеваемости и смертности.
Таким образом, сохраняется постоянная потребность в новых лекарственных средствах, приборах и подходах для восстановления сердечного ритма.
5. Материалы и методы доклинических исследований противоаритмических препаратов: адреналин, аконитин, кальция хлорид
В данном эксперименте использовалось 60 самцов нелинейных крыс (Sprague Dawley) массой 400-500 г. Источник животных – НПП « Питомник лабораторных животных» ФИБХ РАН. Животные содержались в условиях вивария при постоянной температуре (22-24 С) со стандартным свето-темновым циклом (12 ч свет/ 12 ч темнота), с 10-ти кратной сменой объема воздуха в комнате в час. Относительная влажность в комнате содержания животных составляла 30-70%. Корм и воду давали ad libitum. Животные содержались индивидуально в поликарбонатных клетках на подстиле; клетки были покрыты стальными решетчатыми крышками с кормовым углублением. В качестве подстила использовалась нехлорированная резаная автоклавированная бумага. Все процедуры с животными в исследовании были рассмотрены и утверждены институтской комиссией по уходу и использованию животных (IACUC) на предмет соответствия этическим принципам обращения с животными. Исследовательская организация отвечала требованиям утвержденного протокола исследования и стандартным операционным процедурам (СОП) лаборатории. Животные анестезировались (смесью кетами+ксизалин) и подвергались операции по катетеризации яремной вены (для введения исследуемых веществ) и общей сонной артерии (для регистрации артериального давления и частоты сердечных сокращений), а также установке электродов в первом стандартном отведении. После проведения операции крысам вводили один из аритмогенных агентов (адреналин – 0,3 мг/кг, аконитин 0,04 мг/кг, кальция хлорид 8 мг/кг) в хвостовую вену и осуществляли регистрацию частоты сердечных сокращений (ЧСС).
Рис. 1. Количество животных, выживших в эксперименте при различных видах аритмии (%)
Антиаритмические препараты различаются по фармакологическим свойствам и механизмам действия, в связи с чем их делят на 4 класса. Так как неизвестно к какому из классов относится новое соединение, то для адекватной оценки его антиаритмических свойств необходимо изучить антиаритмическую активность исследуемого препарата параллельно на нескольких моделях. Основными моделями аритмий вызванной химическим путем использованной в данной работе были:
Аконитовая модель. Аконитин модифицирует быстрые натриевые каналы в миокардиальных клетках. Если исследуемый препарат проявляет высокую активность на данной модели его относят к I классу антиаритмиков
Хлоридкальциевая модель. Большие дозы кальция хлорида вызывают тяжелые нарушения сердечного ритма, заканчивающиеся обычно летальной фибриляцией желудочков. На данной модели обычно проявляют активность соединения, относящиеся к I и IV классам антиаритмического действия
Хлоридбариевая модель. Хлорид бария угнетает кальциевую проводимость. Данная модель считается адекватной для выявления веществ со свойствами класса III антиаритмического действия.
Адреналиновая модель. Быстрое внутривенное введение адреналина приводит к развитию желудочковой экстрасистолии и моно- или мультифокальной желудочковой тахикардии. Данная модель используется для отбора соединений со свойствами антиаритмиков II и IV классов.
Этиология аритмий включает в себя не только заболевания сердца, но и другие воздействия, такие как рефлекторные нарушения, гуморальный, электролитный, кислотно-щелочной дисбаланс, эндокринные расстройства, что вызывает определенные трудности при их лечении. Известно, что пептиды из семейства эндотелинов и оксид азота (NO) являются эндогенными факторами, которые могут оказывать влияние как на клетки проводящей системы сердца и кардиомиоциты, так и коронарные сосуды. Эндотелин-1 (ЕТ-1) является доминирующим пептидом эндотелиновой системы сердца. Он синтезируется в кардиомиоцитах, эндотелиальных клетках, кардиальных фибробластах и является важным регуляторным агентом в сердце. ЕТ-1 может проявлять аритмогенные свойства, вызывая ишемию коронарных сосудов и оказывая прямое действие на проводящую систему сердца. Известно, что эндотелиновая система сердца тесно связана с NO-синтазной системой. Ингибиторы NO-синтазы могут изменять эффекты ЕТ-1 на сердце, а доноры NO оказывают антиаритмогенное действие на миокард. Однако ряд вопросов, связанных с изучением взаимодействия этих систем и их роли в развитии аритмии, изучены не достаточно. Известно также, что подходы к антиаритмической фармакотерапии в клинической практике за последние 10-15 лет претерпели радикальные изменения. Автономная нервная система принимает непосредственное участие в развитии данного типа аритмии. Причём, блокада парасимпатической нервной системы приводит к снижению вариабельности ЧСС и аритмии на ЕТ-1 главным образом за счёт устранения последствий блокады эндогенного оксида азота. Тогда как блокада симпатической нервной системы подавляет аритмогенность собственно ЕТ-1.
6. Доклинические исследования тромболитического препарата фортелизин
В настоящее время инфаркт миокарда продолжает оставаться одной из наиболее важных проблем отечественного здравоохранения. Тромболитическая терапия остается методом выбора лечения больных инфарктом миокарда.
Фортелизин - это иновационный отечественный препарат, разработанный фармацевтической компанией «СупраГен» для лечения больныхс острым инфарктом миокарда.
Для внедрения препарата Фортелизин в широкую отечественную клиническую практику необходимо было провести его доклиническое изучение в соответствии с действующим законодательством РФ.
Доклинические исследования:
Доклиническое (токсикологическое) изучение отечественного фибринселективного тромболитического препарата Фортелизин®, проведенное в соответствии с действующим законодательством РФ и требо -ваниями, изложенными в «Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Москва, 2005), показало, что препарат является малотоксичным при однократном внутрибрюшинном введении мышам линии BALB/C и внутривенном введении кроликам. Установлено, что однократное внутрибрюшинное введение мышам линии BALB/C препарата Фортелизин® в диапазоне испытанных доз 1250–28 750 мг/кг не вызывает каких-либо признаков интоксикации и гибели животных.
Дальнейшее увеличение доз Фортелизина® ограничивалось максимально допустимым объемом жидкости при данном способе однократного введения мышам. Высшая из испытанных на мышах доза препарата 28 750 мг/кг более чем в 216 000 раз превышала высшую терапевтическую дозу, рекомендованную для человека (10 мг на человека, или 0,133 мкг/кг). При этом не выявлено существенных половых различий в чувствительности мышей линии BALB/с для человека (10 мг на человека, или 0,133 мкг/кг). При этом не выявлено существенных половых различий в чувствительности мышей линии BALB/с к токсическому действию препарата.
Субстанция препарата Фортелизин® при однократном внутривенном введении кроликам в дозе 5,2 мг/кг (40-кратная высшая терапевтическая доза для человека) хорошо переносилась животными и не вызывала токсических проявлений. Изучение токсичности препарата Фортелизин® в условиях субхронических экспериментов проводилось на кроликах при ежедневном в течение 2 недель внутривенном введении субстанции препарата в дозе 2,66 и 1,33 мкг/кг в готовой лекарственной форме (стерильный лиофилизированный порошок по 10 мг во флаконах). Испытанные в субхронических опытах на кроликах дозы препарата превышали высшую терапевтическую дозу для человека в 10 и 20 раз. Как показали проведенные исследования, Фортелизин® в испытанных дозах 2,66 мг/кг (субстанция) и 1,33 мкг/кг (готовая лекарственная форма) в 2-недельных субхронических опытах на кроликах хорошо переносится животными и не влияет на гематологические показатели, функциональное состояние основных органов и систем организма подопытных животных (по данным использованных биохимических тестов и ЭКГ).