Вход

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО СОДЕРЖАНИЯ ФЛАВОНОИДОВ В РАСТЕНИИ КАЛЛЮРИИ ГРАВИЛАТОВИДНОЙ

Рекомендуемая категория для самостоятельной подготовки:
Курсовая работа*
Код 246473
Дата создания 05 февраля 2016
Страниц 29
Мы сможем обработать ваш заказ (!) 29 марта в 12:00 [мск]
Файлы будут доступны для скачивания только после обработки заказа.
1 050руб.
КУПИТЬ

Описание

Целью данной работы явилось определение общего содержания флавоноидов в исследуемом растении.Защита - 2007, оценка - 4. Хакасский государственный университет имени Н.Ф. Катанова ...

Содержание

ВВЕДЕНИЕ 3
1. Литературный обзор 5
1.1.Общее представление о флавоноидах 5
1.2.Классификация флавоноидов 12
1.3.Физико-химические свойства флавоноидов 14
2. Материал и методы исследования 15
2.1.Материал исследования 15
2.2.Методы выделения и идентификации флавоноидов 15
2.3.Качественное определение флавоноидов 16
3. Результаты и их обсуждение 20
3.1.Количественное определение витамина Р (рутина) 20
3.2.Хроматографический анализ суммы флавоноидов
(одномерная бумажная хроматография) 21
ВЫВОДЫ 26
ЛИТЕРАТУРА

Введение

В настоящие время усилия многих фармакологов и химиков направлены на исследование химического состава и лечебных свойств растений, которые еще не входят в ряд лекарственных растений.
Флавоноиды - многочисленная группа растительных фенольных соединений.
Флавоноидные соединения на протяжении последних 20 лет интенсивно изучались в лабораториях многих стран. В итоги количество описанных в литературе выделенных из растений флавоноидов с установленной структурой в настоящее время достигает около 4000.

Фрагмент работы для ознакомления

В гетерофазных системах, таких как клетки или липопротеины, антиоксидантная эффективность флавоноидов во многом определяется их липофильностью и гидроксильностью. Г 3> 1Помимо того, что флавоноиды обладают антирадикальной активности и могут связывать ионы металлов переменной валентности, они стабилизируют мембраны и выступают в качестве структурных антиоксидантов. Проникая в гидрофобную область мембраны, молекулы флавоноидов значительно снижают подвижность липидов, что в свою очередь, снижает эффективность9взаимодействия пероксильных радикалов с новыми липидными молекулами (RO + RH = ROOH + R ) так как о большинстве биологических мембран данная стадия цепных процессов ПОЛ является лимитирующей, то, соответственно, снижается скорость всего процесса окисления. С171В организме человека антиоксидантное действие флавоноидов может быть связанно не только с ингибированием окислительной модификации липопротеинов низкой плотности, приводящим к снижению их захвата макрофагами и гладкомышечными клетками через сквинджер - рецепторы. У людей, потребляющих много соевых продуктов с высоким содержанием флавоноидов, отмечается снижение уровня холерестерина в сыворотке крови.Так же, как токоферолы и убихиноны, в биологических системах флавоноиды взаимодействуют с другими антиоксидантами, такими как аскорбиновая кислота, глутатион или мочевая кислота. Впервые способность флавоноидов (как предполагалось витамин Р) взаимодействовать с аскорбатом была показана ещё в 1936 году, тогда исследование экстрактов из красного венгерского перца выявило наличие фактора, способствующего сохранности аскорбиновой кислоты. Ввиду низкой липофильности аскорбата его защитные свойства при окислении в липосомах или клеточных мембранах слабо выражены, введение флавоноидов (кверцетин, эпикахетин) значительно усиливает антиоксидантное действие, что имеет важное значение для сохранения мембранно - связанных цитохром в присутствии гидроперекисей. Вместе с тем многие флавоноиды, особенно флавоны и флавонолы (кверцетин, рутин, кемпферол, физетин, лютеолин), имеющие двойную связь С2 - Сз, окисляют аскорбиновую кислоту с образованием радикала аскорбата; в то же время дигидрокверцетин способен восстанавливать радикал аскорбата. В отношении окисления липопротеинов сыворотки крови флавоноиды (лютеолин, рутин, катехин, кверцетин, мирицетин, кемпферол, апигенин) действуют синергично с мочевой кислотой, при этом они могут восстанавливать радикалы мочевой кислоты и предохранять от окисления а - токоферол. Рутин синергично с витаминами Е10и С не только ингибировал окисление липопротеинов низкой плотности, но и защищал от их токсического действия эндотелиальные клетки. Напротив, цитотоксичность кверцетина и физетина в отношении клеток карциномы эндотелия человека (НТВ 43) усиливалось аскорбиновой кислотой.Спектр биологических эффектов флавоноидов достаточно широк и не ограничивается только их антиоксидантный действием. В исследованиях in vivo и ex vivo флавоноиды обладали противоопухолевой, антиишемической, антиаллергической, противовоспалительной активностью, выступали в качестве радиопротекторов, ингибировали агрегацию тромбоцитов; кроме того, флавоноиды подавляли активность самых разных ферментов, таких как липоксигеназа, циклооксикеназа, монооксигеназы, ксантиноксидаза, митохондриальные сукцинатдегидрогеназа и NADH - оксидаза, фосфолипаза А2 и протеинкиназы, мембранная и цитозольная тирозинкиназы.Во многих исследованиях in vitro у флавоноидов выявляется как антиоксидантный, так и прооксидантный эффект, особенно в присутствии ионов металлов переменной валентности. С£>1Антиканцерогенное действие флавоноидов на животных и человека показано во многих экспериментальных и эпидемиологических исследованиях. В экспериментах на животных (мыши) было обнаружено, что протяжённое во времени (больше года) вскармливание высоких доз кверцетина индуцирует образование опухолей, что, однако, не подтвердилось в другом долгосрочном исследовании. На модели канцероген -индуцированной опухоли молочной железы у мышей 5, 7, 3 , 4 -тетрагидрокси- 3- метоксифлавон и кверцетин проявляли высокую противоопухолевую активность. Изучение антиканцерогенового действия флавоноидов на модели индуцированного афлатоксином В] гепатоканцерогеназа у крыс показало, что защитным эффектом как на стадии инициации, так и на стадии пролангации обладали соединения, не имеющие ОН - групп (флавон, флавонон, тангеретин), кверцетин в данной модели не11проявлял противоопухолевых свойств. Рутин и кверцетин увеличивали время жизни мышей после прививки NK/ L у клеток асцидной опухоли.1.2. Классификация флавоноидовВ зависимости от степени окисления и гидроксилирования скелета С6-С3- Сб флавоноиды подразделяются на несколько групп: флавоны, флавонолы, флавононы. флавононолы, изофлавоны, антоцианы, халконы, катехины, ауроны и др.: Ц %"]ФЛАВОНОНЫФЛАВОНОЛЫАпегинин ФЛАВАНОНЫкемпферол ФЛАВОНОНОЛЫНарингенин ИЗОФЛАВОНЫФормонетин КАТЕХИНЫаромадендринХАЛКОНЫнIf У IfVJо изоликвиритегинин КСАНТОНЫ21640800ЭпикатехинОН мангиферин12В растениях флавоноиды встречаются как в свободном виде, так и в виде гликозидов. В качестве Сахаров в флавоноидных гликозидах встречаются D -глюкоза, D - галактоза, D - ксилоза, D - манноза, L - арабиноза, L - рамноза; из уроновых кислот обычно встречается D - глюкуроновая кислота.В настоящее время все известные флавоноидные гликозиды разделяются на 3 группы.Первая (основная) группа представлена О - гликозидами, в которых сахара связаны с агликоном полуацетальной связью через атом кислорода. О - гликозиды в зависимости от количества Сахаров, положения и порядка присоединения, делятся на монозиды, биозиды, дигликозиды. Монозиды относятся к наиболее простым соединениям; биозиды при одном и том же наборе Сахаров могут различаться последовательностью и порядком присоединения Сахаров, величиной оксидных циклов и конфигурацией гликозидных связей. Например, известна группа рамногликозидов, в которых рапноза связана с глюкозой по 2, 4 - или 6- углеродному атому. Далее, усложняясь, биозиды переходят в триозиды и олигозиды, у которых сахара могут сочетаться в прямые или разветвленные цепи. Сахара могут быть, кроме того, у двух атомов углерода (дигликозиды).Вторую группу представляют С - гликозиды, или гликофлавоноиды, которые можно подразделить на С - моногликозиды, С - дигликозиды, С - О -дигликозиды, С - О - биозиды. В гликофлавоноидах углеродные заместители связаны с агликоном через углеродный атом в 6- или 8-положениях.К третьей группе флавоноидных гликозидов относятся так называемые комплексные соединения. Они представляют собой ацилированные гликозиды и в зависимости от положения ацильного заместителя делятся на гликозиды депсиноидного типа и гликозиды со сложноэфирной связью в сахарных заместителях. В депсиноидах агликоны обычно связаны с ароматическими кислотами, но известны и сложные эфиры с алифатическими кислотами. Из кислот, выделенных из комплексных13гликозидов, идентифицированы бензойная, п - оксибензойная, протокатеховая, п - оксикоричная, кофейная, феруловая, синаповая, уксусная, пропеоновая и др. С%~]1.3. Физико-химические свойства флавоноидовВ чистом виде флавоноиды представляют собой кристаллические соединения с определенной температурой плавления, желтые (флавоны, флавонолы, халконы и др.), бесцветные (изофлавоны, катехины, флавононы и флавононолы), а также окрашенные в красный или синий цвет (антоцианы) в зависимости от рН среды. В кислой среде они имеют оттенки красного или розового цветов; в щелочной - синего.Агликоны флавоноидов растворяются в этиловом эфире, ацетоне, спиртах, практически не растворяются в воде. Гликозиды флавоноидов, содержащие более трех остатков сахара, растворяются в воде, но нерастворимы в эфире и хлороформе.Агликоны и гликозиды флавоноидов лишены запаха; некоторые из них обладают горьким вкусом. Например, все известные флавонон - 7 - (3 -неогесперидозиды - горькие вещества. Самими горькими веществами являются нарингин и понцирин, они примерно в 5 раз более горькие, чем гидрохлорид хинина, причем их горький вкус обусловлен строением углеродного компонента неогеспиридозы (2-O-a-L- рамнопиранозил -D - глюкопираноза). С S3Флавоноидные гликозиды обладают оптической активностью. Одна из характерных особенностей флавоноидных гликозидов - способностью к кислотному и ферментативному гидролизу. Скорость гидролиза и условия его проведения различны для различных групп флавоноидов. Так, флавон - 3 - гликозиды легко гидролизуются при нагревании со слабыми минеральными кислотами (0,1 — 1 %), а флавон - 7 - гликозиды гидролизуются лишь при нагревании с 5 - 10 % минеральными кислотами в течение нескольких часов.142. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал исследованияКалюрия гравилатовидная. многолетнее растение с одревесневающим корневищем. Стебли одиночные или в числе нескольких, опушенные короткими волосками, слабо облиственные. Прикорневые листья короткочерешковые, прерывисто - перистые, самые верхние их доли трёхлопастные, туповато - зубчатые, крупные; книзу постепенно мельчающие, почти цельнокрайние. Цветки в числе 1 - 3 на верхушке стебля, ярко - жёлтые. Лепестки вдвое длиннее чашелистиков. Орешки ок. 2 мм дл., продолговато - яйцевидные, покрытые стекловидными сосочкамиВстречаются на открытых степях, нередко каменистых склонах. £| 232.2. Методы выделения и идентификации флавоноидовДля выделения флавоноидов проводят экстракцию растительного материала, как правило, одним из низших спиртов. Спиртовое извлечение упаривают, к остатку добавляют горячую воду, и после охлаждения удаляют неполярные соединения (хлорофилл, жирные масла, эфирные масла и др.) из водной фазы хлороформом или четыреххлористым углеродом. Флавоноиды из водной фазы извлекают последовательно этиловым эфиром (агликоны), этилацетатом (в основном монозиды) и бутанолом (биозиды, триозиды ит.д.). С №Для разделения компонентов каждой фракции используют колоночную хроматографию на силикагеле, полиамидном сорбенте или целлюлозе. Элюирование веществ проводят смесью хлороформа с метиловым спиртом с возрастающей концентрацией метилового спирта, спирто-водными смесями с возрастающей концентрацией спирта, если сорбентом служит полиомид, или 5-30% уксусной кислотой в случае целлюлозы. С 12315Для выделения отдельных флавоноидов существуют специфические методы.Для идентификации флавоноидов используют их физико-химические свойства: 1) определение температуры плавления; 2) определение удельного вращения ([a]D гликозидов); 3) сравнение УФ, ИК, масс-, МПР спектров со спектрами известных образцов. С Ч 3УФ спектр флавоноидов характеризуется наличием, как правило, двух максимумов поглощения. Положение максимумов и их интенсивность характерны для различных групп флавоноидов. Флавоноидные гликозиды производные кверцетина (например, рутин) имеют два максимума поглощения при 258 и 361 нм и «плечо» 266 нм. Для цели идентификации вещества используются положения максимумов и «плеча», величина Е-^.Эта величина для рутина равна 325,5, в случае моногликозида кверцитрина она лежит в пределах 350, в то время как у агликона (кверцетина) составляет 718. УФ спектроскопия успешно используется для установления свободных ОН-групп в молекуле флавоноида путем добавления различных реактивов (ацетата натрия, метилата натрия, борной кислоты с ацетатом натрия, хлористого алюминия и т.д.). При добавлении этих реактивов происходит смещение максимумов поглощения, характерное для гидроксильных групп в различных положениях.В ИК спектре флавоноидов имеются полосы поглощения, характерные для различных группировок. Важной для идентификации фдавоноидов является так называемая область «отпечатка пальцев» 800-1200 см" . Совпадение полос группировок и области «отпечатка пальцев» служит надежным признаком идентичности веществ. С 1Щ2.3. Качественное определение флавоноидов. С целью обнаружения флавоноидов в растительном материале широко используется хроматография на бумаге и в тонком слое сорбента.\6Обнаружение компонентов на хроматограммеосуществляетсяпросматриванием их в УФ свете. При этом флавоны, флавонол - 3 -гликозиды, флавононы, халконы обнаруживаются в виде коричневых пятен; флавонолы и их 7 - гликозиды - в виде жёлтых или жёлто - зелёных пятен; ксантоны в виде оранжевых пятен. Изофлавоны при этом не проявляются. После просматривания в УФ свете хроматограммы можно обработать одним из реактивов (5% - ным спиртовым раствором А1С13 с последующим нагреванием при 105 °С в течении 3-5 минут; 5% - ной SbCI3 в четырёххлористом углероде; 2% - ным спиртовым раствором щёлочи), что позволяет получить зоны с более яркой флуоресценцией в УФ свете. £ Ц-2Методики качественного определения. Приготовление из растительного сырья: 1 г. Измельченного сырья помещают в колбу вместимостью 25 мл. и заливают 10 мл. этилового спирта. Колбу соединяют с обратным холодильником и нагревают на водяной бане в течении 10 мин. С момента закипания спирта в колбе. После охлаждения полученное извлечение фильтруют через бумажный фильтр. £$1Качественные реакции. 1. Цианидиновая проба (проба Chinoda). К 2 мл. извлечения добавляют 5-7 капель концентрированной HCI и 10 - 15 мг. Металлического Mg или Zn, через 3-5 минут наблюдается красное, оранжевое, розовое окрашивание. Для ускорения реакции и усиления окраски рекомендуется подогреть реакционную смесь (2-3 мин.) на кипящей водяной бане. £ 101Хроматографическое определение флавоноидов. На круглый диск хроматографической бумаги на расстоянии 0,5 см. от центра наносят исследуемые извлечения и в качестве «свидетелей» - спиртовые растворы рутина и кверцетина. Диаметр пятна не должен превышать 5 мм. В центр диска вводят фильтр из хроматографичесрой бумаги. Хроматографирование проводят в чашках Петри, в качестве растворителя используют 15% - ную уксусную кислоту . Экспозиция 20 - 25 мин. Хроматограммы высушивают до испарения растворителя и просматривают в УФ свете. Отмечают зоны рутина17(коричневая), хлорофилла (красная), кверцетина (жёлтая), ксантонов (оранжевая). Обрабатывают хроматограмму парами аммиака, отмечают переход окраски в жёлто - зелёную или опрыскивают 1% - ным спиртовым раствором хлорида алюминия хлорокиси циркония. После высушивание хроматограммы повторно просматривают в УФ свеие. Образуются ярко флоуресцирующие жёлто - зелёные комплексы с AI (111) или Zr (111). С 141 Метод Высочина Г.И. с соавторами.

Список литературы

1. Абдуллаев Х.В. Противостафилококковая активность некоторых растительных веществ и их производных./УХимия природных соединений.-1994.№.-С.446-453.
2. Биологически активные соединения.//Под ред. Е.Арбузова.-М.:Наука, 1971.-3 05с.
3. Вавилова Н.К., Фурса Н.С. Оксикоричные кислоты будры плющевидной.//Химия природных соединений.-1993.-№2.-С257-259.
4. Георгиевский В.П.,Дмитрук СЕ. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск: Наука , 1990.-333с.
Очень похожие работы
Пожалуйста, внимательно изучайте содержание и фрагменты работы. Деньги за приобретённые готовые работы по причине несоответствия данной работы вашим требованиям или её уникальности не возвращаются.
* Категория работы носит оценочный характер в соответствии с качественными и количественными параметрами предоставляемого материала. Данный материал ни целиком, ни любая из его частей не является готовым научным трудом, выпускной квалификационной работой, научным докладом или иной работой, предусмотренной государственной системой научной аттестации или необходимой для прохождения промежуточной или итоговой аттестации. Данный материал представляет собой субъективный результат обработки, структурирования и форматирования собранной его автором информации и предназначен, прежде всего, для использования в качестве источника для самостоятельной подготовки работы указанной тематики.
bmt: 0.00526
© Рефератбанк, 2002 - 2024