Вход

Химико-токсикологическое определение фенобарбитала.

Рекомендуемая категория для самостоятельной подготовки:
Курсовая работа*
Код 173223
Дата создания 2012
Страниц 38
Источников 13
Мы сможем обработать ваш заказ 24 мая в 12:00 [мск]
Файлы будут доступны для скачивания только после обработки заказа.
1 320руб.
КУПИТЬ

Содержание

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КСЕНОБИОТИКА
1.1 Название ксенобиотика
1.2 Химическая природа
1.3 Физико-химические свойства
1.4 Применение фенобарбитала
1.5 Класс токсичности
1.6 Токсикометрические параметры
1.7 Клинические признаки при отравлении
1.8 Стадии отравления
1.9 Методы детоксикации
1.10 Обоснование применения антидотной терапии
2 ТОКСИКОДИНАМИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ КСЕНОБИОТИКА
2.1 Молекулярные механизмы формирования токсического эффекта
2.2 Влияние на токсичность физико-химических свойств токсиканта и параметров среды
2.3 Количественная корреляция структура — активность. Зависимости доза – ответ
2.4 Сочетанные воздействия с физическими факторами среды
3 ТОКСИКОКИНЕТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1 Токсикокинетические модели при оценке токсичности
3.2 Кривые концентрация-время, AUC для ксенобиотика
3.3 Период полувыведения, объем распределения и клиренс
3.4 Механизмы биотрансформации
4 ВОПРОСЫ АНАЛИТИЧЕСКОЙ ТОКСИКОЛОГИИ
4.1 .Методология проведения клинико-токсикологического анализа
4.1.1 Отбор проб биоматериала у живых лиц или извлечение органов и тканей из трупа
4.1.2 Изолирование ксенобиотика
4.2 Методы идентификации
4.3.Методы количественного определения
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Фрагмент работы для ознакомления

И. Попова). Согласно этому способу, биологический материал настаивают с водой подкисленной серной кислотой рН 2.0—3.0. Смесь биологического материала и подкисленной воды настаивают в течение 2 ч при частом перемешивании. Затем вытяжку сливают, а биологический материал еще 2 раза настаивают с новыми порциями 0,02 н. серной кислоты (по 80 мл) в течение I ч. Кислые водные вытяжки соединяют, процеживают через сложенную в 3 слоя марлю и центрифугируют в течение 25—30 мни.Центрифугат сливают с осадка и очищают от примесей методом гель-хроматографии, который обеспечивает хорошую очистку барбитуратов, выделенных из биологического материала.После очистки вытяжек из биологического материала с помощью гель-хроматографии получают большие объемы элюатов с низким содержанием барбитуратов. Поэтому элюаты подвергают экстракционному концентрированию. 3) Изолирование барбитуратов подщелоченной водой. В стакан или коническую колбу вносят 100 г измельченного биологического материала.прибавляют 180 мл воды и 20 мл 10% раствора гидроксида натрия. Содержимое стакана (или колбы) оставляют на 30 мин при частом перемешивании, а затем центрифугируют в течение 30 мин (3000 об/мин). От осадка отделяют надосадочную жидкость (центрифугат), к которой прибавляют 120 мл 10% раствора вольфрамата натрия и 1 н. серной кислоты (рН 2,0). Жидкость нагревают на кипяшей водяной бане в течение 20 мин. а затем подвергают центрифугированию в течение 30 мин. Центрифугат сливают с осадка и процеживают через ватный тампон.смоченный водой. Процеженную жидкость собирают в делительную воронку. Тампон промывают водой (10 мл), Промывную воду тоже выливают в делительную воронку. К процеженной жидкости прибавляют равный объем диэтилового эфира и взбалтывают в течение 15 мин. Эфирный слой отделяют и взбалтывают с 50 мл 10% раствора гидроксида натрия. Щелочной водный слой отделяют, подкисляют 25% раствором серной кислоты до рН 2.0 и взбалтывают с равным объемом диэтилового эфира. Полученную при этом эфирную вытяжку используют для обнаружения и количественного определения барбитуратов [6, c. 624].4.2 Методы идентификацииИдентификация фенобарбитала может производиться с помощью качественных хромогенных («цветных») реакций, реакций осаждения, микрокристаллоскопических реакции, методов хроматографии, УФ- и ИК-спектроскопии и др [2].Одной из первых качественных реакций на фенобарбитал была реакция Парри - взаимодействие барбитуратов с изопропиламином и солями кобальта, в результате которой образуются внутрикомплексные соединения, окрашенные в фиолетовый цвет:Рис.8. Структура комплексного соединениякобальта с фенобарбиталомПри взаимодействии фенобарбитала с пиридином и солями меди также образуются труднорастворимые(кристаллические или аморфные) комплексные соединения.Рис.9. Структура комплексного соединения меди с фенобарбиталом [2]Интересна реакция Цвиккера с солями кобальта и щелочами. От прибавления хлорида кобальта и гидроксида бария к барбитуратам образуется окрашенное соединение. Следует иметь в виду, что вода разлагает окрашенное комплексное соединение.Тест нитрата ртути также применяется для определения фенобарбитала. К насыщенному раствору нитрата ртути (I) прибавляют бикарбонат натрия до окончания выделения газа и образования жслюго осадка. Через некоторое время осадок меняет цвет на светло-коричневый. Используется только свежеприготовленный реактив (не более 1 ч). Перед употреблением реактив взбалтывают. Пробу растворяют в минимальном количестве этанола и добавляют каплю реактива. После перемешивания проверяют окраску в течение 2 мин. Одновременно проводят реакцию с чистым этанолом в качестве контроля. Темно-зеленое или черное окрашивание указывает на возможное присутствие вещества с имидной группировкой в кольце.Широкое распространение последнее десятилетие получили иммунохимические тесты. При исследовании барбитуратов ИХМ используются для проведения скрининга большого числа образцов, главным обрядом биологического происхождения. Получаемые при этом результаты позволяют сделать предположение о возможном наличии в тестируемом объекте вещества из группы барбитуратов без проведения внутригрупповой дифференцировки Продолжительность исследования обычно составляет от нескольких минут до нескольких часов [6, c. 628].К настоящему времени отечественными и зарубежными производителями налажен выпуск наборов и реактивов для ИФА, метода поляризационного флуороиммуноанализа (ПФИА), метода ингибирования латексной агглютинации, радиоиммунных методов (РИА), а также иммунохроматографические наборы. На результаты тестирования оказывает влияние тин используемого растворителя,рН среды, интенсивность излучения и температура проведения анализа. Важнейшее значение имеет реакционная способность иммунных реактивов.которые достаточно быстро, особенно при несоблюдении правил их хранения, теряют свою активность.Тонкослойная хроматография широко используется для исследования барбитуратов и большого числа веществ других групп — наркотиков, лекарств, пестицидов, метаболитов этих веществ. Этот вид хроматографии полезен в качестве препаративного метода. Хроматографирование барбитуратов обычно осуществляют на пластинах с закрепленными слоями силикагеля с добавлением флюоресцентного индикатора или без него.Системы растворителей• Система А: этиланетат-метанол — 25% раствор аммиака (85:10:5).• Система В: хлороформ — ацетон (80:20).• Система С: изонропанол: хлоро<1юрм: 25% раствор аммиака (90:90:20).После проведения разделения пластины тщательно просушивают для удаления следов хроматографической системы, особенно следов аммиака. Для этого их нагревают при 120 °С в течение 5 мин в термостате или обдувают горячим воздухом с помошью лабораторных фенов. Качество операции определяется по наличию запаха аммиака. Далее пластины просматривают в УФ-свете при длине волны 254 и 366 нм и отмечают наличие хроматографических зон, после чего их обрабатывают реактивом хлорида ртути с дифенилкарбазоном. Реактив хлорида ртути с дифенилкарбазоном обладает самой высокой чувствительностью к барбитуратам среди многих других, однако он высокотоксичен и должен быть использован с соответствующей предосторожностью[6, c. 630].Барбитураты проявляются в данных условиях в виде сине-фиолетовых пятен ни розовом фоне. Предел обнаружения составляет от I до 5 мкг барбитурата в пятне.Наиболее простым и информативным методом определения фенобарбитала в настоящее время является метод ВЭЖХ, позволяющтий определять фенобарбитал как качественно, так и количественно. Для разделения барбитуратов методом ВЭЖХ в качестве подвижной фазы (элюента) используется смесь 0,05 М водного раствора двухзамещенного фосфата аммония и метанола (60:40). Скорость потока элюирования составляет 100 мкл/мин. Детектирование барбитуратов проводится при длине волны 240 нм. Идентификация барбитуратов, содержащихся в биопробах, проводится по следующей методике:а) сопоставляются время (объем) удерживания и коэффициент емкости определяемого компонента и образца сравнения (контрольный раствор) фенобарбитала. Хромотограмма имеет вид, указанный на рис. 10[4, c.165]:б) сравниваются УФ-спектры предполагаемого компонента и образца сравнения (на рис. 11 приведены УФ-спектрыфенобарбитала и этаминала натрия в растворе подвижной фазы);в) оценивается совпадение значений времени удерживания определяемого компонента и образца сравнения при добавлении контрольного раствора в раствор экстракта из биопробы (концентрация образца должна быть близка к концентрации определяемого компонента);г) сопоставляются УФ-спектры определяемого компонента и образца сравнения при двух длинах волн, и оценивается их спектральное отношение.Рис.11. УФ-спектрыфенобарбитала и этаминала натрия в растворе подвижной фазы4.3.Методы количественного определенияДля количественного определения барбитуратов, выделенных из биологического материала, применяют общеизвестные и широко распространенные фотоколориметрические и спектрофотометрические методы (предварительно аналит связывают в окрашенный комплекс с помощью одной из «цветных реакций»).Для количественного анализа барбитуратов в биопробахс помощью ВЭЖХ можно использовать различные методы, в том числе метод добавки, метод внешнего стандарта, метод внутреннего стандарта и т.д. Перспективно применение метода ИК-Фурье-спектрометрии в комбинации с методом ВЭЖХ. В таком случае повышается точность получаемых результатов. В соответствии с методом добавки проводят анализ раствора экстракта биопробы и этого же раствора, но с добавкой в него раствора, известной концентрации предполагаемого барбитурата (контрольного раствора). Анализы растворов «без добавки» и «с добавкой» должны проводиться в одном масштабе регистрации.Концентрация определяемого вещества (Ci) в растворе экстракта ,биопробы определяется по формуле:В соответствии с методом внешнего стандарта и с учетом линейности зависимости выходного сигнала от массы вещества последовательно, с анализом раствора экстракта биопробы, проводят анализ контрольного раствора идентифицированного вещества. Концентрация контрольного раствора (Ck) должна быть близка к концентрации определяемого вещества в растворе экстракта. Анализы контрольного раствора и экстракта биопробы должны проводиться в одном масштабе регистрации. Концентрацию определяемого вещества (Ci) рассчитывают по формуле[4, c.167]:В соответствии с методом внутреннего стандарта в биообъект до операции пробоподготовки добавляется известное количество вещества, принятого за стандарт. В анализе барбитуратов в количестве внутренних стандартов рекомендуется использовать одно из следующих веществ: апробарбитал, метилфенобарбитал, фенилгидантоин и другие вещества.В данных условиях хроматографического разделения они должны полностью отделяться от других компонентов образца, должны элюироваться близко к пику анализируемого соединения, не реагировать с другими компонентами, т.е. удовлетворять требованиям, предъявляемым к внутреннему стандарту. Можно использовать одновременно два и более внутренних стандарта.Концентрацию определяемого вещества (Ci) рассчитывают по формуле:Причем калибровочный фактор Fi/вс вычисляется по формуле:ЗАКЛЮЧЕНИЕВпредставленной работе нами были рассмотрены важнейшие химико-токсикологическиесвойствафенобарбитала. В заключение, выпишем основные выводы по разделам курсовой работы.В первом разделе охарактеризованы общие свойства фенобарбитала. Химическое название вещества согласно международной номенклатуре ИЮПАК - 5-фенил-5-этилбар-битуровая кислота. Фенобарбитал является производным барбитуровой кислоты и применяется как противоэпилептическое лекарственное средство из обширной группы барбитуратов. Фенобарбитал представляет собой белый кристаллический порошок без запаха и со слабогорьким вкусом, слаборастворимый в воде, но хорошо растворимый в спирте и щелочах. Фенобарбитал является сильнодействующим успокаивающим, снотворным и противосудорожным средством, обладающим спазмолитическими и сосудорасширяющими свойствами. Относится к слабым наркотическим средствам. Вызывает привыкание при длительном употреблении. Выделяют клинические стадии интоксикациифенобарбиталом. При значительной передозировке препарата возможен летальный исход (летальная доза – 2-10 г), поэтому при отравлении требуется немедленное медицинское вмешательство. Специфичного антидота не существует. Противодействие отравлению осуществляется стандартными способами. В особо тяжелых случаях необходим гемодиализ.Во втором разделе работы рассмотрены токсикодинамические характеристики препарата. Наличием в составе молекулы фенобарбитала двух индольныхатомов обусловлена его способность образовывать водородные связи при взаимодействии с белками и, соответственно, активность препарата и длительность его воздействия (8-12 часов). Фенобарбитал обладает кумулятивным эффектом.Третий раздел работы посвящен токсикокинетическим характеристикам вещества. Длительность действия фенобарбиталаопределяется в первую очередь перераспределением, а не метаболизмом, либо элиминацией. После приема внутрь фенобарбитал полностью, но медленно всасывается в тонком кишечнике. Общаябиодоступность составляет 80%. Связывание с белками плазмы (преимущественно с альбумином) составляет 20-45%. T1/2 из плазмы у взрослых — 53-118 ч (в среднем 79 ч), у детей и новорожденных (возраст менее 48 ч) — 60-180 ч, в среднем 110 ч. Клиренс фенобарбитала у взрослых составляет 0,062±0,013 мл/(мин.кг). Практически все барбитураты, в том числе и фенобарбитал,биотрансформируются до неактивных метаболитов, которые затем выводятся с мочой.В четвертом, заключительном, разделе данной работы описана методология проведения качественного и количественного анализа на содержание фенобарбитала у живых лиц и в трупном материале.У живых лиц практикуется анализ крови и мочи на фенобарбитал. В последнее время, с развитием аналитического оборудования, практикуется анализ волос, ногтей, пота и слюны, содержащих значительно меньшее количество биоматериала и, следовательно, поглощенного фенобарбитала. Барбитуратов и, в частности, фенобарбитал, в трупном, загнившем материале, достаточно стабильны, и сохраняются достаточно длительное время (более полугода) при низкой степени извлечения.Изолирование барбитуратов осуществляется несколькими способами: нейтральной водой, водой, подкисленной серной кислотой, а также подщелоченной водой по методикам, описанным в работе.Идентификация фенобарбитала может производиться с помощью качественных хромогенных («цветных») реакций, реакций осаждения, микрокристаллоскопических реакции, методов хроматографии, УФ- и ИК-спектроскопии и др.При количественном определении фенобарбитала используются преимущественно методы ВЭЖХ, УФ-спектроскопии, фотометрия и спектрометрия. Методики проведения анализа в целом стандартны для аналитической химии (метод добавок, метод внешнего и внутренного стандартов).СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫБарбитуровая кислота и ее производные. [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://toxichemistry.ru/shvaykova/veschestva-ekstragiruemyie-iz-kislogo-rastvora/barbiturovaya-kislota-i-ee-proizvo.htmlБарбитураты и методы их исследования. [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.xumuk.ru/toxicchem/71.html.Горская М.Н. Судебно-медицинские аспекты отравлений фенобарбиталом. Афтореферат к диссертации. – СПб, Санкт-Петербургский химико-фармацевтический институт., 1992.Еремин С.К., Изотов Б.Н., Веселовская Н.В. Анализ наркотических средств. Руководство по химико-токсикологическому анализу наркотических и других одурманивающих средств. Под ред. проф. Б. Н. Изотова. М., изд-во «Мысль», 1993. – 271 с.Елизарова О.Н., Жидкова Л.В., Кочеткова Т.А. Пособие по токсикологии для лаборантов. М.: Медицина, 1974. – 169 с.Калетина Н.И. (ред.) Токсикологическая химия Метаболизм и анализ токсикантов. Учеб.пособие. - М.:Издательская группа «ГЭОТАР-Медиа», 2007.-1008 стр.Клиническая токсикология. Фенобарбитал. [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.kuban.su/medicine/shtm/baza/lek/klfhtm/part8/8-247.htmКурляндский Б.А., Филов В.А. (ред.) Общая токсикология. М.: Медицина, 2002. - 608 с.МелентьевА.Б.Определение фенобарбитала и циклобарбитала в крови методом газовой хроматографии - масс спектрометрии с использованием микроэкстракции. // Известия Челябинского научного центра, 2004, № 2 (23), с. 47 – 51.Симонов Е.А., Найденова Л.Ф., Ворнагов С.А. Наркотические средства и психотропные вещества, контролируемые на территории Российской Федерации. Под ред. Рогозина ВВ. - М.: «InterLab», 2003. – 412 с.Суворов А.В. Справочник по клинической токсикологии. Нижний Новгород: Изд. НГМА, 1996 - 91 с.Рожнов Г.И. Шашкина Л.Ф. Фенобарбитал // Токсикологический вестник, 2000, № 1.-С.40-41.Фенобарбитал (Phenobarbital) - инструкция по применению, описание, Фармакологическое действие, показания к применению, дозировка и способ применения, противопоказания, побочные действия [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://gipocrat.ru/farmacied_d4_10.phtml.

Список литературы [ всего 13]

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1.Барбитуровая кислота и ее производные. [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://toxichemistry.ru/shvaykova/veschestva-ekstragiruemyie-iz-kislogo-rastvora/barbiturovaya-kislota-i-ee-proizvo.html
2.Барбитураты и методы их исследования. [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.xumuk.ru/toxicchem/71.html.
3.Горская М.Н. Судебно-медицинские аспекты отравлений фенобарбиталом. Афтореферат к диссертации. – СПб, Санкт-Петербургский химико-фармацевтический институт., 1992.
4.Еремин С.К., Изотов Б.Н., Веселовская Н.В. Анализ наркотических средств. Руководство по химико-токсикологическому анализу наркотических и других одурманивающих средств. Под ред. проф. Б. Н. Изотова. М., изд-во «Мысль», 1993. – 271 с.
5.Елизарова О.Н., Жидкова Л.В., Кочеткова Т.А. Пособие по токсикологии для лаборантов. М.: Медицина, 1974. – 169 с.
6.Калетина Н.И. (ред.) Токсикологическая химия Метаболизм и анализ токсикантов. Учеб. пособие. - М.:Издательская группа «ГЭОТАР-Медиа», 2007.-1008 стр.
7.Клиническая токсикология. Фенобарбитал. [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://www.kuban.su/medicine/shtm/baza/lek/klfhtm/part8/8-247.htm
8.Курляндский Б.А., Филов В.А. (ред.) Общая токсикология. М.: Медицина, 2002. - 608 с.
9.Мелентьев А.Б. Определение фенобарбитала и циклобарбитала в крови методом газовой хроматографии - масс спектрометрии с использованием микроэкстракции. // Известия Челябинского научного центра, 2004, № 2 (23), с. 47 – 51.
10.Симонов Е.А., Найденова Л.Ф., Ворнагов С.А. Наркотические средства и психотропные вещества, контролируемые на территории Российской Федерации. Под ред. Рогозина ВВ. - М.: «InterLab», 2003. – 412 с.
11.Суворов А.В. Справочник по клинической токсикологии. Нижний Новгород: Изд. НГМА, 1996 - 91 с.
12.Рожнов Г.И. Шашкина Л.Ф. Фенобарбитал // Токсикологический вестник, 2000, № 1.-С.40-41.
13.Фенобарбитал (Phenobarbital) - инструкция по применению, описание, Фармакологическое действие, показания к применению, дозировка и способ применения, противопоказания, побочные действия [Электронный ресурс]. – Режим доступа: http://gipocrat.ru/farmacied_d4_10.phtml.
Пожалуйста, внимательно изучайте содержание и фрагменты работы. Деньги за приобретённые готовые работы по причине несоответствия данной работы вашим требованиям или её уникальности не возвращаются.
* Категория работы носит оценочный характер в соответствии с качественными и количественными параметрами предоставляемого материала. Данный материал ни целиком, ни любая из его частей не является готовым научным трудом, выпускной квалификационной работой, научным докладом или иной работой, предусмотренной государственной системой научной аттестации или необходимой для прохождения промежуточной или итоговой аттестации. Данный материал представляет собой субъективный результат обработки, структурирования и форматирования собранной его автором информации и предназначен, прежде всего, для использования в качестве источника для самостоятельной подготовки работы указанной тематики.
© Рефератбанк, 2002 - 2022